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多价抗人精浆蛋白/抗CD3双特异性单链抗体的活性研究
目的探讨多价抗人精浆蛋白/抗CD3双特异性单链抗体的生物学活性.方法利用流式细胞仪和51Cr释放试验评价多价双特异性单链抗体的抗原亲和活性和体外介导杀伤靶细胞的效果.利用母性BALB/C裸鼠前列腺癌模型分析多价双特异性单链抗体在体内介导细胞毒T淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤的能力.结果多价双特异性抗体可以特异性结合表达PSA的前列腺癌细胞和CD3阳性淋巴瘤细胞,阳性结合率分别为74%和83%.在体外,有细胞毒T淋巴细胞存在时多价抗体可引起前列腺癌细胞裂解.与对照组比较,接种前列腺癌细胞的裸鼠在注射激活的细胞毒T淋巴细胞的同时接受多价抗体治疗后,肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.05).结论多价抗人精浆蛋白/抗CD3双特异性单链抗体具有良好的生物学活性,在体内外均可以介导细胞毒T淋巴细胞对靶细胞的杀伤.
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抗前列腺癌γ-精浆蛋白人源Fab抗体的原核表达和特性鉴定
目的:对从噬菌体抗体库筛选的抗γ-精浆蛋白(γ-sm)人源化Fab抗体进行表达纯化和生物学特性鉴定,为其应用于前列腺癌抗体导向酶-前药治疗奠定基础.方法:首先将重组表达载体γ-sm-hFab/pComb3X转化大肠杆菌并诱导其可溶性表达,亲和纯化后采取Western-blot检测表达产物对γ-sm抗原结合特异性.其次分别采用抑制ELISA和竞争抑制ELISA方法分析表达纯化的抗γ-sm人源Fab抗体的亲和力和结合表位.后采用竞争抑制流式细胞术和免疫组化超敏S-P法鉴定制备纯化的人源Fab抗体在前列腺癌细胞和组织上的结合分布特性.结果:成功诱导表达和纯化出理论分子量大小可溶性Fab抗体蛋白,含量约占细菌总可溶性蛋白的20.5%,Western-blot证实其能特异性结合识别γ-sm.抑制ELISA显示其表观结合常数(Ka)为0.78×108 M-1,亲和力约为亲本鼠源单抗E4B7的37.5%,竞争抑制ELISA进一步显示,二者识别γ-Sm抗原蛋白上的表位相同.流式细胞术和免疫组化显示,表达纯化的人源Fab抗体可显著地与前列腺癌细胞和组织特异性结合,其结合主要分布在腺上皮内瘤和中低度恶性的前列腺癌组织上.结论:成功地对筛选的抗γ-sm人源Fab抗体进行了原核可溶性表达、纯化和免疫生物学特性鉴定,为其进一步应用于抗体导向酶-前药实验治疗前列腺癌奠定了基础.
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抗γ-精浆蛋白特异性单链抗体的RTS表达及其生物学活性的检测
目的: 制备人精浆蛋白特异性单链抗体,并检测其生物活性与靶向性.方法: 应用快速翻译系统(RTS)表达γ-精浆蛋白特异性单链抗体,制备E4B7ScFv肽段和纳米颗粒偶联物,应用免疫沉淀反应、Western Blotting法、免疫荧光染色分析和细胞实验,研究该抗体进入前列腺癌细胞的活性.结果:成功地制备了抗γ-精浆蛋白特异性单链抗体纳米颗粒偶联物.该抗体可与前列腺癌细胞特异性结合,并可在15 min内将纳米磁珠带入前列腺癌细胞内,进入癌细胞的磁球数量随着细胞培养时间的延长而增多,对照实验显示该偶联物不能进入其它组织肿瘤细胞.结论:制备的抗γ-精浆蛋白特异性单链抗体生物活性与靶向性均较好,在前列腺癌的早期核磁共振显像诊断与靶向治疗上具有潜在的应用价值.
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双特异性单链抗体介导的T细胞对前列腺癌细胞的杀伤作用
目的 研究并比较两种抗人γ-精浆蛋白/抗CD3双特异性单链抗体介导T细胞杀伤前列腺癌细胞的作用.方法 利用流式细胞仪分析双特异性单链抗体(BsAb)及多价双特异性单链抗体(mBsAb)与LNCaP细胞和Jurkat细胞的亲和力;将LNCaP细胞作为靶细胞,分为抗体浓度固定组和效应细胞/靶细胞比例固定组,利用51Cr释放试验评价两种双特异性单链抗体在体外介导T细胞杀伤靶细胞的能力;将Jurkat细胞种植裸鼠后,建立裸鼠前列腺癌模型,并分为非治疗组、对照组、BsAb组和mBsAb组,进一步评价两种双特异性单链抗体在体内介导T细胞杀伤靶细胞的能力.结果 流式细胞仪结果显示:BsAb和mBsAb均可特异性结合LNCaP细胞和Jurkat细胞,阳性结合率分别为56.3%、55.4%和74%、83%.51Cr释放试验结果显示:在体外,BsAb和mBsAb均可介导T细胞对前列腺癌细胞的杀伤,并且T细胞的杀伤效率与抗体浓度和效应细胞/靶细胞比例呈正相关.与非治疗组和对照组比较,接种前列腺癌细胞的裸鼠在体内注射激活的细胞毒T细胞的同时分别接受两种抗体的治疗后,肿瘤生长均明显受到抑制(P＜0.05).另外,体外介导杀伤作用和体内抑制肿瘤生长等方面,多价双特异性抗体的效果明显优于双特异性抗体.结论 同时识别人γ-精浆蛋白和CD3分子的双特异性单链抗体可有效地介导T细胞对前列腺癌细胞的杀伤作用,并且双特异性单链抗体四聚体的形成可明显改善抗体介导杀伤作用的效率.
