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肾移植术后尿中多瘤病毒BK的检测及意义
目的探讨尿中多瘤病毒BK(BKV)检测在肾移植后BKV感染中的诊断价值.方法采用聚合酶链反应(PCR)结合测序方法检测61例肾移植后患者尿中BKV DNA,并与30例血液透析患者和30例健康志愿者尿液检测结果对照.结果肾移植组BKV DNA检出率为36.1%(22/61),明显高于血液透析组的13.3%(4/30)(P＜0.05),对照组检测均为阴性(P＜0.05).1例BKV阳性肾移植患者出现输尿管梗阻.移植组发生排斥反应和未发生排斥反应患者的BKV DNA检出率分别为40.9%(9/22)和33.3%(13/39),P＞0.05;肾功能正常和异常者BKV DNA的检出率分别为36.0%(18/50)和36.4%(4/11),P＞0.05.结论肾移植患者是引起BKV尿的高危人群.肾移植后有无排斥反应史及肾功能正常与否与BKV尿无相关性.尿BKV检测可作为肾移植后BKV相关性输尿管梗阻的鉴别诊断和多瘤病毒相关性肾病的筛选方法.
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不同标签辅助的IBTX原核表达纯化及活性鉴定
目的:在原核体系中建立高效表达纯化IBTX(Iberiotoxin)的工艺,并比较不同标签对IBTX生物活性的影响.方法:利用引物搭桥的方法,经PCR扩增,获得IBTX编码基因,以此为模板分别构建了表达质粒PET32a(+)-IBTX、pGex-6p-1-IBTX、pDuet-MBP-IBTX,并将其转入E.coli (BL21)分别表达带有硫氧还原蛋白(TRX)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的IBTX融合蛋白,在经过亲和层析、烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶酶切、C18反向层析纯化后真空冻干得到IBTX干粉,以电生理实验检测其生物活性.结果:在三种标签帮助下通过原核体系表达出的IBTX都能够特异性的阻断大电导Ca2+激活的钾通道(BK)电流,其中MBP帮助折叠的m-IBTX活性佳.结论:建立了IBTX在MBP标签帮助下的原核表达纯化工艺,为进一步研究蝎钾离子通道α家族神经毒素及其突变体的原核表达奠定了基础.
