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衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1蛋白IN5部分的克隆、表达、鉴定及其对沙眼衣原体抑制作用的研究
目的 探讨衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1蛋白IN5部分在Vp1抑制沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)生长过程中的作用.方法 以Vp1质粒为模板,PCR扩增IN5环基因片段,构建重组质粒pET28a/IN5,转化后诱导表达鉴定,收集纯化的IN5蛋白.将IN5蛋白、Vp1蛋白及各对照组作用于Ct培养过程中,48 h后碘染色及间接免疫荧光进行包涵体计数,采用单因素方差分析比较各组间包涵体均数的差异,若各组均数间差异有统计学意义,采用Bonferroni法对任两个均数进行比较,后计算IN5蛋白和Vp1蛋白对Ct的抑制率.结果 成功地诱导表达出Vp1蛋白的IN5部分,并发现在浓度均为53 μg/mL时,IN5蛋白对Ct的抑制率为52.42%,而Vp1的抑制率为78.04%.结论 IN5蛋白同样对Ct生长有抑制作用,但较Vp1弱,这为寻找Vp1蛋白抑制Ct生长的优势蛋白区域提供了初步探索的经验.
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衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构分析及分段克隆表达
目的 预测衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构,并将Vp1表达为更小的蛋白片段,为后续实验奠定基础.方法 通过蛋白空间结构分析网站I-TASSER和PredictProtein对phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构进行预测,应用TA克隆的方法将Vp1分为不同的部分进行克隆表达,后通过West-ern blot技术分别对目的蛋白进行鉴定.结果 根据空间结构预测结果以及相关背景资料将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1分为Vp11-189和Vp1190-502两部分进行克隆表达,目的蛋白Vp1 1-189和Vp1190-502的基因序列长度分别为567bp和939bp,经检索确定两蛋白碱基序列与Genebank结果相同.而且,Western blot结果显示两目的蛋白的相对分子质量分别为20kDa和35kDa.结论 成功将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1分为Vp11-189和Vp1190-502两部分进行表达,这为后期的深入研究提供了一定的实验基础.
