首页 > 文献资料
-
PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞及其表达产物的测定
目的:测定真核表达载体PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞的表达产物hTGF-β1,为椎间盘退变的基因治疗提供实验基础.方法:用免疫组织化学方法对转染细胞进行表达产物测定;用VIDAS数据分析系统对实验数据进行定量分析.结果:原代纤维环细胞转染中真核表达载体PCI-hTGF-β1阳性细胞产物的光密度值为PCI组的3.49～3.56倍,为未转染组的3.43～3.55倍;原代髓核细胞转染中真核表达载体PCI-hTGF-β1阳性细胞产物的光密度值为PCI组的3.46～3.69倍,为未转染组的3.33～3.63倍.结论:真核表达载体PCI-hTGF-β1可以成功转染体外培养的成人退变椎间盘细胞,并可获得hTGF-β1基因产物的高表达.
关键词： 退变椎间盘细胞 细胞培养 PCI-hTGF-β1 体外 转染 -
β-七叶皂苷钠对体外退变椎间盘细胞抗炎作用及机制研究
目的 探讨β-七叶皂苷钠对体外退变椎间盘细胞抗炎作用及机制.方法 采用体外培养的退变椎间盘细胞,免疫印迹法检测0、5、10、20 μmol/L β-七叶皂苷钠作用24 h后,炎性因子白介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及相关调控蛋白细胞核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达变化.结果 β-七叶皂苷钠可显著抑制退变椎间盘细胞炎性因子IL-1、TNF-α表达,退变椎间盘细胞中调控炎性因子表达的蛋白NF-κB在β-七叶皂苷钠作用后表达显著降低,而TGF-β1表达水平显著升高.结论 β-七叶皂苷钠可通过抑制NF-κB途径以及上调TGF-β1表达,显著抑制退变椎间盘细胞的炎性反应.
-
L-氨基胍对体外培养退变椎间盘细胞中炎性因子水平的影响
目的:研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-氨基胍(L-AG)对体外培养的退变椎间盘细胞中炎性因子水平的影响,并探讨其作用机制.方法:采用体外培养的退变椎间盘细胞为研究对象,根据L-AG浓度分为0(对照组)、0.5％、1.0％和1.5％组,作用24 h后,分光光度法检测NOS活性和一氧化氮(NO)水平,免疫印迹法检测炎性因子白细胞介素1 (IL-1)、白细胞介素6(IL-6)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平.结果:0.5％、1.0％、1.5％ L-AG组退变椎间盘细胞中NOS活性分别为6.1、5.5和4.2U·mL-1,NO水平分别为128.3、116.5和97.7 μmol·L-1,与对照组比较均显著降低(P＜0.01);与对照组比较,不同浓度L-AG组退变椎间盘细胞中IL-1、IL-6及TNF-α表达水平均显著降低(P＜0.01).结论:NOS抑制剂L-AG可显著降低退变椎间盘细胞炎性反应,其作用机制可能与NOS抑制有关.
-
益气化瘀补肾方对脊髓型颈椎病患者退变椎间盘细胞Col Ⅰ与ColⅡmRNA表达的影响
目的:观察益气化瘀补肾方含药血清对脊髓型颈椎病患者退变椎间盘细胞Col Ⅰ、ColⅡmRNA表达的影响.方法:选择脊髓型颈椎病患者经手术摘除的椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞；以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清.将传代第1代的退变椎间盘细胞接种于96孔酶标板中,分为6组,分别予低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度的益气化瘀补肾方古药血清及相应浓度生理盐水血清DMEM培养液培养.通过实时荧光定量PCR检测Col Ⅰ、ColⅡmRNA的表达.结果:不同浓度的益气化瘀补肾方血清对椎间盘细胞增殖有明显的促进作用；与生理盐水组比较,益气化瘀补肾方不同浓度含药血清干预后椎间盘细胞ColⅡmRNA表达水平上调、ColⅠ mRNA表达水平下调,尤以中浓度更为明显(P＜0 01).结论:益气化瘀补肾方可能通过影响椎间盘组织胶原的变化而发挥防治脊髓型颈椎病椎间盘退变的作用.
