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蛋白激酶Cα-胞外调节蛋白激酶1/2与人气道平滑肌细胞中周期蛋白D1及P21cip1 表达的关系
目的 探究蛋白激酶C(PKC)α-胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2级联对支气管哮喘(简称哮喘)患者血清被动致敏的人气道平滑肌细胞(HASMC)周期蛋白D1(cyclinD1)、周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂P21 cipl的调节作用及细胞增殖的影响.方法 用含10%哮喘患者血清的DMEM培养基被动致敏HASMC后,按随机数字表法分为对照组、12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)处理组、PMA+PKCα错配寡核苷酸组、PMA+PKCα反义寡核苷酸组以及PMA+U0126组,每组4个样本.用Western blot方法检测各组细胞磷酸化PKCα(p-PKCα)、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、cyclinD1和P21 cipl的蛋白表达水平,用流式细胞术和四甲基偶氮唑盐(MT)法检测HASMC增殖.结果 PMA处理组p-PKCα水平、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白水平高于对照组,cyclinD1、P21 cipl表达明显强于对照组(相对于各对照组的A值分别为2.10±0.29、1.67±0.19、2.20±0.27、1.99±0.22和3.11±0.29,均P＜0.05),HASMC的增殖[S期细胞比例为(30.3±2.4)%,A490值为0.80±0.06]高于对照组[S期细胞比例为(13.9±2.6)%,A490值为0.41±0.04],均P＜0.05;PMA+PKCα反义寡核苷酸组中p-PKCα水平低于PMA处理组,ERK1/2和p-ERK1/2表达明显弱于PMA处理组,cyclinD1和P21 cipl 表达也明显低于PMA处理组(相对于各对照组的A值分别为1.23±0.19、1.34±0.18、1.52±0.20、1.45±0.18和1.49±0.18,均P＜0.05),HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为(21.2±2.8)%,A490值为0.51±0.04;q值分别为6.07,12.63;均P＜0.05];同样与PMA处理组相比,PMA+U0126组中p-PKCα水平无明显改变(A值为1.99±0.18,q=0.94,P＞0.05),但ERK1/2、P-ERK1/2的表达,cyclinD1和P21 cipl的表达明显低于PMA处理组A值分别为0.95±0.21、1.15±0.19、1.37±0.15和1.96±0.21,均P＜0.05),HASMC的增殖显著下降[S期细胞比例为(22.0±3.2)%,A 490值为0.49±0.03;q值分别为5.51、13.45,均P＜0.05].结论 ERK1/2是PKCα的下游信号分子,PKCα-ERK1/2级联参与了PMA所诱导的哮喘患者血清被动致敏的人气道平滑细胞cyclinD1、P21 cipl的表达上调及细胞增殖.
关键词： 蛋白激酶Cot 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞周期蛋白D1 肌细胞 平滑肌
