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短发夹样核糖核酸文献资料
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大鼠叉头蛋白转录因子O1基因的shRNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率的鉴定
目的 构建针对大鼠叉头蛋白转录因子O1(FoxO1)基因的shRNA慢病毒载体,并在大鼠系膜细胞(RMCs)上鉴定其沉默效率. 方法 利用四质粒合成法合成慢病毒载体.分别用阴性对照慢病毒载体(LV-shNC-GFP组)、shRNA慢病毒载体(LV-shRNA-FoxO1组)和感染增强剂(NC组)处理RMCs.72 h后,采用流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性表达率.采用荧光定量PCR检测FoxO1 mRNA表达情况.15 d后,采用蛋白免疫印迹法检测FoxO1蛋白的表达情况. 结果 LV-shNC-GFP、LV-shRNA-FoxO1组GFP阳性表达率分别为87.4％、95.8％；LV-shRNA-FoxO1组FoxO1的mRNA与蛋白表达量较NC、LV-shNC-GFP组均降低(P＜0.05).其mRNA及蛋白抑制率分别达到86.2％和77.3％,而LV-shNC-GFP、LV-shRNA-FoxO1组FoxO1的mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 成功构建大鼠FoxO1基因的shRNA慢病毒载体能高效、稳定地抑制FoxO1的表达,为进一步研究FoxO1的功能和作用机制奠定研究基础.
关键词： 叉头蛋白转录因子O1 短发夹样核糖核酸 慢病毒载体 系膜细胞 大鼠
