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转录因子MEOX2文献资料
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应用酵母双杂交技术筛选转录因子MEOX2的相互作用蛋白
目的研究同源盒基因Meox2所编码的转录因子MEOX2在心肌细胞内与哪些蛋白质存在相互作用.方法应用酵母双杂交技术对人心脏cDNA文库进行筛选.(1)通过PCR方法扩增编码组氨酸/谷氨酸(H/Q)富含区缺失的MEOX2蛋白质(Meox2△HQ)的DNA片断,并克隆进入pGBKT7载体,从而构建"诱饵"质粒pGBKT7-Meox2△HQ;(2)将"诱饵"质粒pGBKT7-Meox2△HQ转化酵母菌AH109,然后从被转化的酵母菌中提取蛋白质,应用抗C-Myc单克隆抗体进行免疫印迹分析,检测"诱饵"蛋白的表达;(3)将被"诱饵"质粒转化的AH109分别涂布于SD/-Trp、SD/-Trp/-His、SD/-Trp/-Ade和SD/-Trp/X-α-GAL平板上,以观察"诱饵"蛋白自我激活报告基因与否;(4)将已被"诱饵"质粒转化的AH109与人心脏cDNA文库进行杂交,筛选阳性克隆,分离阳性克隆中的cDNA,并测序.结果Meox2△HQ与pGBKT7中的Gal4 DNA结合域及C-myc在同一读框,并稳定表达融合蛋白"Gal4 DNA结合域-C-myc-Meox2△HQ","诱饵"蛋白不会自我激活报告基因,筛选得到¨个准阳性克隆.结论同源盒基因Meox2所编码的转录因子MEOX2可能与心肌细胞中的多种蛋白质存在相互作用,并参与这些蛋白质表达的调控.
