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肿瘤相关基因Cap43在胰腺癌中的表达及意义
目的研究肿瘤相关基因Cap43在胰腺癌组织中的表达情况,探讨其对胰腺癌的诊断价值.方法收集1999年4月～ 2002年8月长海医院外科手术切除胰腺癌标本和癌旁正常组织33例,诊断均由病理证实.男性22例,女性11例,年龄30 ～ 73岁,平均58.1岁.所有组织标本按肿瘤、癌旁(正常)配对.采用RT-PCR和Northern杂交方法研究Cap43 mRNA表达情况.结果 RT-PCR结果显示,Cap43在肿瘤组织中表达显著上调,其在肿瘤组织和癌旁正常组织的扫描值分别为4 033 ± 1 986和2 244 ± 1 145,有显著差异(P < 0.001).Northern杂交亦显示Cap43在肿瘤组织中表达显著上调,相同病例的RT-PCR结果与Northern杂交的结果有较好的一致性,经回归分析,没有显著性差异(P > 0.1).结论 Cap43在胰腺癌组织中呈显著高表达,其有可能成为胰腺癌早期诊断的重要标志物.
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兔抗Cap43多克隆抗体制备和初步纯化
目的 制备兔抗Cap43多克隆抗体.方法 以30个氨基酸组成的多肽为半抗原与钥孔血蓝蛋白(mcKLH)通过碳化二亚胺(EDC)法化学偶联成完全抗原(多肽-mcKLH)免疫家兔;制备兔抗Cap4443多克隆抗体;斑点ELISA法检测抗体效价,经辛酸-硫酸铵法初步纯化抗体后,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳考马斯亮蓝检测其纯化后的纯度.结果 经免疫11周得到兔抗Cap43多克隆体,抗体效价为1:500.结论 采用EDC化学偶联半抗原和大分子载体蛋白mcKLH,使其成为同时具有免疫原性与免疫反应性的完全抗原,用其免疫家兔获得多克隆抗体.
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两种方法检测肺癌患者CAP43蛋白的结果比较
目的 探讨肺癌患者血清和肿瘤组织中Cap43蛋白的表达水平与肺癌不同组织学分型闻的关系.方法 通过建立双抗体夹心ELISA法初步定性和定量检测91肺癌患者与正常人群血清中Cap43蛋白含量,并采用免疫组化S-P方法检测83例肺癌术后病例的肿瘤组织切片中Cap43蛋白表达程度.结果 初步建立的双抗ELISA血清学检测方法中确定的包被羊抗人NDRG1多克隆抗体,Ⅰ抗免抗人Cap43多克隆抗体,辣根酶(HRP)标记的羊抗免Ⅱ抗的佳工作浓度分别为1:750,1:1200,1:350,标准蛋白曲线的回归方程为:y=0.53566+0.00046x,R2=0.9939,P＜0.0001.应用该方法初步检测结果提示肺癌患者血清腺癌组Cap43含量明显高于鳞癌组(P＜0.05),同时免疫组化检测结果也提示肺腺癌组的Cap43表达程度比鳞癌组高(P＜0.05).结论 肺癌患者血清中以及肿瘤组织Cap43的表达程度与其肿瘤的组织学类型密切相关.
