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TRPC和CHRM在人类胃肠道间质瘤中的表达
目的:探讨瞬时受体电位通道(transient receptor potential channels,TRPC)和胆碱能毒蕈碱受体(muscarinic acetylcholine receptors,CHRM)在人类胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)中的表达及相关性.方法:以免疫组织化学的方法检测TRPC及CHRM在GIST肿瘤细胞中的表达及相关性分析.结果:人类GIST细胞中存在TRPC1、TRPC3、CHRM2、CHRM3的表达,阳性率分别为57.5％、47.5％、22.5％、55.0％,且随着GIST生物学行为恶性潜能分级的增高其表达水平分别下降.结论:本研究证明人类GIST细胞中存在TRPC和CHRM的表达,为GIST起源于Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)提供了新的证据,为GIST是否保留了部分ICC的胃肠起搏和介导神经递质传递功能奠定了基础.
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异氟醚对东莨菪碱致空间认知障碍大鼠脑受体和ChAT酶活性的影响
目的观察异氟醚对东莨菪碱致空间认知障碍大鼠脑皮层和海马组织中胆碱乙酰基转移酶(ChAT)、胆碱能毒蕈碱受体(M-R)、N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA-R)活性的影响.方法雄性SD大鼠55只随机分为8组:对照/1 d组(Con/1 d),异氟醚/1 d组(Iso/1 d),东莨菪碱/1 d组(Sco/1 d),异氟醚+东莨菪碱/1 d组(Iso+sco/1 d);对照/7 d组(Con/7 d),异氟醚/7 d组(Iso/7 d),东莨菪碱/7 d组(Sco/7 d),异氟醚+东莨菪碱/7 d组(Iso+sco/7 d).Iso组、Iso+sco组大鼠每天吸入1 MAC(1.5%)异氟醚2 h,连续4 d.在末次给药后1 d,对Sco/1 d组、Iso+sco/1 d组大鼠腹腔注射东莨菪碱0.8 mg/kg,连续3 d;在末次给药后7 d,对Sco/7 d组、Iso+sco/7 d组大鼠给与相同处理.给药完毕后急性断头处死大鼠,分离脑皮层和海马,Fonnum法测ChAT酶活性,放射配体结合分析法测定M-R和[3H]QNB、NMDA-R和[3H]MK-801的结合活性,并选择1d组大鼠的海马进行受体饱和实验,用Scatchard作图法分析M-R的平衡解离常数(Kd)和大受体结合量(Bmax)的变化.结果各组大鼠皮层和海马组织的ChAT酶和NMDA-R活性、皮层M-R活性和Kd和Bmax无差异.与Con/1 d组和Iso/1 d组相比,Sco/1 d组、Iso+sco/1 d组海马M-R活性降低(P＜0.01).与Con/1 d组相比,Iso/1 d组海马M-R活性增高(P＜0.05).与Sco/1 d组相比,Iso+sco/1 d组海马M-R活性增高(P＜0.01).与Con/7 d组和Iso/7 d组相比,Iso+sco/7 d组和Sco/7 d组海马M-R活性降低(P＜0.05).与Con/1 d组与Iso/1 d组相比,Sco/1 d组和Iso+sco/1d组的Kd增高(P＜0.01).与Con/1 d组和Sco/1 d组相比,Iso/1 d组和Iso+sco/1 d组的Bmax增高(P＜0.01).结论大鼠持续吸入1.5%异氟醚4 d(每天2 h)可引起海马M-R密度的短暂改变,增加海马M-R活性.
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慢性氟中毒子代大鼠大脑胆碱能毒蕈碱受体的表达
目的 观察饮水型慢性氟中毒子代大鼠学习记忆能力及大脑胆碱能毒蕈碱受体(Muscarinic acetylcholine receptors,mAChRs,简称M受体)mRNA和蛋白表达,探讨慢性氟中毒子代大鼠中枢神经系统损伤发生机制.方法 健康纯系SD大鼠40只,按体质量采用随机数字表法分为2组,每组20只,雌雄各半.对照组:自由饮用自来水(含氟量＜ 0.5 mg/L);染氟组:自由饮用加入氟化钠(NaF)的自来水(含氟量为50.0 mg/L).2组大鼠给予标准饲料(含氟量为6.2 mg/kg)喂养.6个月后2组大鼠分别交配,每组新生仔鼠由母乳喂养.采集出生第1、7、14、21、28天仔鼠脑组织(各时间点每组10只),采用实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测M1 、M3受体mRNA及蛋白表达水平;采用Morris水迷宫方法检测出生第28天仔鼠行为学变化,并分析第28天仔鼠学习记忆能力与M1、M3受体蛋白表达的相关性.结果 染氟组第28天仔鼠逃避潜伏期时间[(35.61±9.00)s]较对照组显著延长[(8.46±3.09)s,P＜0.05],空间探索次数及逗留平台象限时间[(5.00±2.90)次,(16.66±2.79)s]较对照组明显减少[(15.17±3.66)次,(22.51±2.66)s,P均＜0.05].第1、7、14、21、28天染氟组仔鼠脑组织M1、M3受体mRNA、蛋白表达水平均低于对照组[对照组M1 mRNA:(100.00± 11.00)％、(100.00±17.57)％、(100.00±9.14)％、(100.00±7.52)％、(100.00±15.78)％;染氟组M1 mRNA:(20.47±8.07)％、(14.00±4.53)％、(16.57±7.62)％、(25.56±12.78)％、(16.27±4.82)％;对照组M3 mRNA:(100.00±16.30)％、(100.00±14.40)％、(100.00±7.20)％、(100.00±14.31)％、(100.00±13.16)％;染氟组M3 mRNA:(29.17±8.00)％、(12.77±2.22)％、(26.40±7.20)％、(15.74±3.55)％、(28.14±7.53)％;对照组M1蛋白:(100.00±2.24)％、(100.00±8.30)％、(100.00±4.61)％、(100.00±13.78)％、(100.00±11.72)％;染氟组M1蛋白:(20.47±8.07)％、(14.00±4.53)％、(16.57±7.62)％、(25.56±12.78)％、(16.27±4.82)％;对照组M3蛋白:(100.00±16.30)％、(100.00±14.40)％、(100.00±7.20)％、(100.00±14.31)％、(100.00±13.16)％;染氟组M3蛋白:(29.17±8.00)％、(12.77±2.22)％、(26.40±7.20)％、(15.74±3.55)％、(28.14±7.53)％,P均＜0.05或＜0.01].相关分析结果发现,第28天仔鼠逃避潜伏期时间与M1、M3蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.827、-0.742,P均＜0.05),空间探索次数与M1、M3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.843、0.806,P均＜0.05).结论 不同阶段的慢性氟中毒大鼠所生仔鼠脑组织M受体及蛋白表达水平明显不同程度降低,这可能是氟中毒引起动物学习记忆能力降低的机制之一.
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慢性氟中毒大鼠大脑胆碱能毒蕈碱受体的表达
目的 观察慢性氟中毒大鼠大脑胆碱能毒蕈碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,mAChR,简称M受体)mRNA和蛋白表达,探讨其在慢性氟中毒性脑损伤及学习记忆能力降低发生机制中的作用.方法 选择健康SD大鼠60只,采用随机数字表法按体质量分为2组:对照组和染氟组,每组30只,雌雄各半.对照组大鼠自由饮用自来水(含氟量＜ 0.5 mg/L);染氟组饮用氟化钠和自来水配制溶液(含氟量为50.0 mg/L),2组大鼠均饲以标准饲料(含氟量为6.2 mg/kg).实验10个月后,用Morris水迷宫方法检测大鼠行为学变化(代表学习能力的逃避潜伏期时间和代表记忆能力的空间探索次数);应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测大鼠大脑组织M受体亚型M1、M3的mRNA及蛋白表达;分析学习记忆能力与M1、M3受体蛋白表达的相关关系.结果 染氟组大鼠逃避潜伏期时间[(21.68±2.90)s]较对照组[(6.14±1.71)s]延长(t=0.289,P＜0.05);空间探索次数[(11.62±2.26)次]较对照组[(19.00±3.69)次]降低(t=0.352,P＜0.05).染氟组大鼠大脑组织M1、M3受体mRNA表达[(17.07±6.89)％、(12.25±5.03)％]及蛋白表达[(71.07±6.89)％、(32.25±4.66)％]均低于对照组[(1 00.00±3.00)％、(100.00±2.15)％和(100.00±9.01)％、(100.00±10.33)％,t=0.210、0.157、0.095、0.296,P均＜0.05].相关分析结果显示,大鼠逃避潜伏期时间与M1、M3蛋白表达呈负相关关系(r=-0.683、-0.700,P均＜0.05),空间探索次数与M1、M3蛋白表达呈正相关关系(r=0.867、0.837,P均＜0.05).结论 慢性氟中毒大鼠大脑组织M受体mRNA及蛋白表达水平降低,可能是氟中毒大鼠学习记忆能力降低的机制之一.
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异氟醚对东莨菪碱致空间认知障碍大鼠胆碱能毒蕈碱受体活性的影响
目的观察异氟醚对东莨菪碱致空间认知障碍大鼠脑皮层和海马组织中胆碱能毒蕈碱受体(M-R)活性的影响.方法雄性SD大鼠56只随机分为8组:对照/1d组,异氟醚/1d组,东莨菪碱/1d组,异氟醚+东莨菪碱/1d组;对照/7d组,异氟醚/7d组,东莨菪碱/7d组,异氟醚+东莨菪碱/7d组.异氟醚组、异氟醚+东莨菪碱组大鼠每天吸入1MAC(1.5%)异氟醚2h,连续4d.在末次给药后1d,对东莨菪碱/1d组、异氟醚+东莨菪碱/1d组大鼠腹腔注射东莨菪碱0.8mg/kg,连续3d;在末次给药后7d,对东莨菪碱/7d组、异氟醚+东莨菪碱/7d组大鼠给予相同处理.给药完毕后急性断头处死大鼠,分离脑皮层和海马,放射配体结合分析法测定M-R的活性.结果与对照/1d组和异氟醚/1d组相比,东莨菪碱/1d组、异氟醚+东莨菪碱/1d组海马M-R活性降低(P＜0.01).与对照/1d组相比,异氟醚/1d组海马M-R活性增高(P＜0.05).与东莨菪碱/1d组相比,异氟醚+东莨菪碱/1d组海马M-R活性增高(P＜0.01).与对照/7d组和异氟醚/7d组相比,东莨菪碱/7d组、异氟醚+东莨菪碱/7d组海马M-R活性降低(P＜0.05).结论大鼠持续吸入1.5%异氟醚4d(每天2h)可增加海马M-R的活性.
