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RNA干扰p21对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响
目的:探讨RNA干扰技术沉默p21基因对肝癌细胞SMMC-7721增殖及恶性表型变化的影响.方法:通过慢病毒载体将p21小干扰RNA片段稳定转染入SMMC-7721细胞,通过RT-PCR,Western blot分别检MJp21 Mrna和蛋白表达变化,流式细胞仪检测7721-p2l RNAi组(感染p21 siRNA慢病毒载体组)、7721-NC组(感染阴性对照慢病毒载体组)、7721组(未转染组)细胞生长周期,MTT法检测转染后SMMC-7721细胞生长情况,细胞克隆形成实验检测单细胞锚定依赖性成克隆能力.结果:慢病毒载体可有效介导p21小干扰RNA片段进入SMMC-7721细胞,经RTPCR及West-ern blot检测,p2l小干扰RNA可以明显降低SMMC-7721细胞p21 Mrna和蛋白的表达.流式细胞仪检测细胞周期发现,各组G0/G1期比例分别为32.82%±3.27%,61.25%±0.76%,57.77%±4.08%,S期比例分别为42.56%±5.62%,22.91%±1.53%,25.13%±5.11%.经统计学分析,7721-p2l RNAi组.G0/G1期比例较其余两组下降(P<0.05),S期比例较其余两组升高(P<0.05),而7721-NC组与7721组相比差异无显著性.MTT法检测细胞生长速度发现,与7721-NC和7721组细胞相比,7721-p21RNAi组细胞的生长速度较快,每天的活细胞数目均多于另外两种细胞系(P<0.05).细胞克隆形成实验发现7721-p21 RNAi组、7721-NC组及7721组克隆形成数分别为81.24±1.5,51.67±2.08,52.73±1.53个.7721-p21 RNAi组克隆形成数明显多于7721-NC组、7721组(P<0.05),7721-NC组克隆形成数与7721组无明显差异.表明p21表达下降可加速SMMC-7721细胞从G1期进入S期,细胞生长速度加快,单细胞锚定依赖性成克隆能力增强.结论:本研究通过RNA干扰技术反向验证了p21具有抑制肝癌细胞生长及细胞周期进程的作用,为下一步深入研究p21抑制细胞增殖的机制及在肝癌发生发展中所起的作用打下了基础.
