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丹参酮ⅡA对人胰腺癌细胞凋亡的诱导作用及其对SAPK/JNK信号转导通路的影响
目的:研究丹参酮ⅡA诱导人胰腺癌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的JNK信号转导通路,揭示其抗胰腺癌的部分机制.方法:MTT法观察丹参酮ⅡA对人胰腺癌PANC-1细胞的生长抑制作用;8、16、32 mg/L丹参酮ⅡA分别作用人胰腺癌PANC-1细胞48 h后,免疫荧光染色观察细胞凋亡情况;流式细胞仪法(FCM)检测细胞凋亡;Westem blot检测丹参酮ⅡA作用PANC-1细胞后SAPK/JNK信号通路的激活情况,荧光定量PCR检测Survivin基因mRNA的表达水平;并比较阻断JNK信号通路后,丹参酮ⅡA对胰腺癌细胞凋亡Survivin基因mRNA的表达.结果:MTT法测得丹参酮ⅡA对人胰腺癌PANC-1细胞的生长抑制率均有显著的抑制作用,其作用与剂量和作用时间成正相关;丹参酮ⅡA作用48 h后,荧光显微镜下观察到经Hoechst染色的典型凋亡细胞.8、16、32 mg/L浓度丹参酮ⅡA作用人胰腺癌细胞后的细胞凋亡率分别为8.83%±1.51%,12.86%±2.70%和21.24%±2.58%,与对照组(0.63%±0.18%)比较,均有显著性差异(均p<0.01);阻断JNK信号通路后,凋亡率明显降低(P<0.01).丹参酮ⅡA作用人胰腺癌细胞1 h后JNK信号通路被激活,4 h达峰值.16 mg/L丹参酮ⅡA作用人胰腺癌细胞48 h后,Survivin mRNA的表达明显下降,分别为正常细胞的0.61,0.39,0.10倍;阻断JNK信号通路后,丹参酮ⅡA作用人胰腺癌细胞的Survivin mRNA的表达明显上升.结论:丹参酮ⅡA能诱导人胰腺癌PANc-1细胞株凋亡.通过JNK信号转导通路下调Survivin mRNA的表达可能是其诱导胰腺癌细胞凋亡的重要机制.
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铝致大鼠皮层神经元凋亡及应激活化蛋白激酶活性的变化
目的探讨氯化铝(AlCl3)对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用及其与应激活化蛋白激酶,又称c-jun氨基末端激酶(SAPK/JNK)信号转导通路的关系.方法原代无血清培养至第7天,用不同剂量AlCl3(0、10、100、1000 μmol/L)处理大鼠皮层神经元48 h,然后用琼脂糖凝胶电泳及Annexin Ⅴ联合PI染色法检测细胞凋亡;用免疫印迹法(Western blot)检测SAPK/JNK磷酸化水平的时间变化规律.结果各染铝组均出现DNA ladder这一典型的凋亡特征,且随剂量增加渐趋明显.各剂量组细胞凋亡率明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),呈明显的剂量-效应关系.6 h时SAPK/JNK磷酸化程度达到高,以后逐渐降低,呈时间-效应关系(P<0.05).结论铝诱导大鼠皮层神经元凋亡可能与SAPK/JNK信号转导通路有关.
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扶正抗癌方通过 SAPK／JNK －Sp1通路对 H1650细胞增殖的影响
目的：探讨扶正抗癌方抑制H1650细胞增殖的分子机制。方法 MTT活力检测法观察扶正抗癌方对H1650细胞增殖的影响；蛋白质印迹法检测扶正抗癌方对p－SAPK／JNK、SAPK／JNK和Sp1蛋白表达的影响，并加入SP600125（SAPK／JNK抑制剂）后检测扶正抗癌方对Sp1表达的影响； MTT活力检测法观察抑制SAPK／JNK后扶正抗癌方对H1650细胞增殖的影响。结果扶正抗癌方以浓度和时间依赖性抑制H1650细胞的增殖（P＜0.05）；扶正抗癌方以时间依赖性上调 p－SAPK／JNK和SAPK／JNK蛋白的表达（P＜0.05），以浓度依赖性下调Sp1蛋白的表达（ P＜0.05）；抑制SAPK／JNK逆转了扶正抗癌方对Sp1蛋白表达的下调和对H1650细胞增殖的抑制作用（ P＜0.05）。结论扶正抗癌方可通过介导SAPK／JNK通路抑制Sp1蛋白的表达，进而抑制H1650细胞的增殖。
