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磁性荧光双标人骨髓间充质干细胞归巢至大鼠急性损伤肝组织示踪显像
目的 观察磁粒子和荧光染料双标人骨髓间充质干细胞归巢至大鼠急性损伤肝组织的示踪.方法 以超顺磁性氧化铁(SPIO)和氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)标记永生化人骨髓间充质干细胞(UE7T-13).普鲁士蓝染色检测细胞内铁,荧光显微镜和流式细胞仪检测CM-Dil标记阳性率.建立12只急性肝损伤大鼠模型,分为实验组(n=6)和对照组(n=6),将标记细胞经尾静脉移植入实验组大鼠,未标记细胞移植入对照组大鼠.分别于移植前3h、移植后3h、3天、5天、7天应用MR T2*W、T2* map对大鼠活体成像,获得肝脏R2*值.并与肝脏组织切片普鲁士蓝染色和CM-Dil荧光表达情况对照.结果 双标细胞的SPIO-PLL标记率接近100％,流式细胞仪检测CM-Dil标记阳性率达99.97％.实验组细胞移植后3天、5天肝脏R2*值均较移植前明显升高(t=7.282、7.608,P均＜0.01),对照组细胞移植后各时间点与移植前比较,R2*值差异均无统计学意义(F=0.99,P＞0.05).普鲁士蓝阳性细胞主要分布于肝小叶中央静脉周围病变区,荧光显微镜下观察红色荧光阳性细胞与普鲁士蓝阳性细胞分布基本一致.结论 SPIO和CM Dil可有效标记人永生化骨髓间充质干细胞(UE7T-13),不影响细胞增殖能力,临床应用型1.5T MR可对磁粒子标记的UE7T-13进行肝归巢活体示踪,CM-Dil有助于证实存活干细胞的肝内定植.
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氯甲基苯甲酰氨和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷标记示踪大鼠脂肪干细胞的研究
目的 比较研究氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)和5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的体外标记示踪效果,为ADSCs移植治疗勃起功能障碍体内研究寻找佳的干细胞示踪剂.方法 分离和培养SD大鼠ADSCs,分别采用10μmol/L CM-Dil荧光活性染料和50 μmol/L EdU标记第4代ADSCs,并通过流式细胞术和荧光显微镜检测标记后第7、14、21、28天细胞阳性率.结果 CM-Dil和EdU两者对ADSCs生物学特性均无明显影响.CM-Dil标记ADSCs阳性率达(99.6±0.2)％,第21天后荧光开始衰减,第35天细胞阳性率仍达(64.2±3.3)％；EdU标记ADSCs阳性率为(87.1±1.8)％,7d后细胞阳性率逐渐降低,第14天后急剧降低,第28天细胞阳性率为(14.4±2.7)％.结论 CM-Dil和EdU两者均适用于ADSCs标记示踪,CM-Dil标记具有操作简单、标记阳性率高、荧光持久等优点,适用于长期标记示踪,EdU仅适用于短期标记示踪.
关键词： 氯甲基苯甲酰氨 5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷 示踪 脂肪干细胞
