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TGF-βⅡ受体和磷酸化Smad2蛋白在食管癌中的表达及意义
目的 探讨转化生长因子β-Ⅱ型受体(TβRⅡ)和磷酸化Smad2(P-Smad2)蛋白在食管癌发生和发展中的作用.方法 应用Western blot技术对38例手术切除的食管癌标本和12例癌旁组织中的TβRⅡ、P-Smad2的表达进行检测.结果 食管癌中TβRⅡ、P-Smad2的表达明显低于癌旁组织,具有显著性差异(P＜0.05);但TβRⅡ、P-Smad2的表达在不同临床病理特征(年龄、性别构成比、组织分化程度、有无淋巴结转移)中差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 食管癌组织中存在TβRⅡ和Smad2 的蛋白表达异常,可能与食管癌的发病有关.
关键词： TβRⅡ P-Smad2 食管癌 Western blot -
癌相关成纤维细胞通过TGF-βRⅡ/smad7调控前列腺癌细胞株PC-3增殖
目的 研究癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs )通过TGF-β/Smads 信号通路对前列腺癌细胞株PC3、LNCaP增殖能力的影响及通路关键蛋白TGF-βRⅡ、Smad2、Smad7在其中的作用.方法 原代培养源于人前列腺癌基质的CAFs.Western blot检测CAFs、PC3和LNCaP 细胞TGF-β受体II型(TGF-βRⅡ)表达.用CAFs原代培养液制备条件培养液 CAFs-CM,用TGF-βRⅡ抑制剂(LY2109761)处理CAFs后制备出另一条件培养液CAFs-LY-CM,分别观察PC3和LNCaP在常规培养基、CAFs-CM、CAFs-LY-CM条件培养液中的增殖能力及差异性,以及活性形式磷酸化的Smad2(P-Smad2)、Smad7表达水平的变化.结果 CAFs、PC3细胞阳性表达TGF-βRⅡ,LNCaP 细胞呈弱阳性表达.和常规培养基相比,浓度为0.75g/L CAFs-CM的条件培养基可显著提升PC3[分别为(6.36±0.65)和(2.94±0.19),P<0.05]和LNCaP细胞[分别为(5.06±0.38)和(2.86±0.39),P<0.05]的增殖能力.CAFs-CM上调PC3细胞Smad7蛋白表达水平,对LNCaP细胞P-Smad2蛋白表达几无影响.采用10-6mol/L LY2109761处理CAFs后,CAFs-LY-CM可显著抑制PC3细胞增殖[分别为(4.09±0.36)和(6.36±0.65),P<0.05],并呈剂量依赖性,但对LNCaP细胞增殖无显著抑制作用.结论 CAFs通过TGF-βRⅡ/Smad7关键蛋白调控PC3增殖,是PCa潜在的治疗新靶点.CAFs通过TGF-β信号通路调控LNCaP细胞增殖的作用不显著,存在其他的分子机制.
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慢性胰腺炎模型大鼠转化生长因子β1/Smads通路被秋水仙碱的抑制
背景：胰腺星状细胞内转化生长因子β1/Smads信号通路活化可能是导致胰腺组织纤维化的主要分子学机制。如能阻断这一通路，就可能抑制慢性胰腺炎组织的纤维化进程。目的：探讨秋水仙碱对慢性胰腺炎模型大鼠转化生长因子β1/Smads通路的抑制作用。方法：健康雄性 SD 大鼠随机分为慢性胰腺炎组及秋水仙碱干预组，慢性胰腺炎造模成功后，秋水仙碱干预组大鼠每日腹腔内注射秋水仙碱150μg/ kg，慢性胰腺炎组则每日腹腔内注射等体积的生理盐水。3个月后取胰腺组织，苏木精-伊红染色观察胰腺组织的病理学改变，免疫组化观察胰腺组织转化生长因子β1表达， Western blot法测定胰腺星形细胞内P-Smad2、P-Smad3、α-SMA蛋白表达水平。结果与结论：苏木精-伊红染色结果显示：与秋水仙碱干预组相比，慢性胰腺炎组胰腺组织内腺体组织减少，而纤维结缔组织、炎细胞明显增多并取代胰腺腺体组织。免疫组化结果显示：秋水仙碱干预组胰腺组织内转化生长因子β1阳性表达级别和阳性细胞指数显著低于慢性胰腺炎组(P <0.05)。Western blot结果显示：慢性胰腺炎组胰腺星形细胞内 P-Smad2/β-actin、P-Smad3/β-actin、α-SMA/β-actin 表达明显低于秋水仙碱干预组(P <0.05)。结果提示秋水仙碱可以抑制慢性胰腺炎大鼠转化生长因子β1/Smads信号通路及胰腺组织纤维化。因此，秋水仙碱可作为治疗慢性胰腺炎纤维化的一种新的候选方案。
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烟草烟雾通过TGF-β1/Smad2通路诱导RLE-6TN发生上皮间质转化
目的:探讨烟草烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)在诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN发生上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用及机制.方法:以不同浓度(0.25％,0.5％及1％)CSE刺激RLE-6TN细胞株;TGF-β1受体抑制子(SB431542)预处理后,加入1％ CSE共培养.实时定量PCR (RT-PCR)检测E-cadherin和Vimentin RNA表达;印迹法(Western blot)检测TGF-β1、Smad2、磷酸化的Smad2(p-Smad2)、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达量.结果:经不同浓度的CSE作用,E-cadherin无论是在RNA还是在蛋白水平表达均下调,而Vimentin表达均上调;同时,TGF-β1、p-Smad2和N-cadherin蛋白表达量增加;TGF-β1受体抑制子(SB43542)干预后,p-Smad2表达量明显降低(P＜0.05),E-cadherin蛋白表达量较对照组明显增加(P＜0.05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达量较对照组明显降低(P＜0.05).结论:CSE可能通过激活TGF-β1/Smad2信号通路,参与调节E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达,从而诱导RLE-6TN发生EMT.
关键词： 大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞 烟草烟雾提取物 上皮间质转化 TGF-β1 P-Smad2 -
Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化
目的:观察Smad3基因敲除小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的变化,探讨Smad3基因敲除小鼠肾是否有Smad2和p-Smad2代偿性增加.方法:4只Smad3基因敲除小鼠,10只野生型小鼠,应用免疫组织化学显色技术,检测Smad2和p-Smad2蛋白的定位和表达情况,并用Motic病理图像分析系统对图像进行半定量分析.结果:野生型小鼠肾Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质中有广泛弱表达,p-Smad2蛋白在肾远端小管和肾集合管细胞胞质、胞核中也有弱表达,而Smad3基因敲除小鼠的Smad2和p-Smad2的表达比野生型小鼠有显著升高.结论:Smad3基因敲除能引起小鼠肾Smad2和p-Smad2表达的代偿性增加.
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PPM1A和P-Smad2在原发性肝癌中表达及意义研究
目的 探讨肝癌及癌旁组织中P-Smad2蛋白与PPM1A的表达及意义.方法 采用免疫组织化学技术检测31份肝癌(HCC)、25份癌旁组织及13份非癌性肝组织中P-Smad2蛋白和PPM1A的表达.结果 ① 癌旁和病理分级小于Ⅱ级的癌组织中PPM1A表达以核为主,胞浆表达弱或不表达,病理分级大于Ⅲ级及以上的癌细胞中则以胞浆表达为主,正常、慢性肝炎和肝硬化组织中,PPM1A表达以核为主,胞浆无表达,差别有统计学意义(P＜0.05).② P-Smad2在正常肝细胞、慢性肝炎、肝硬化、癌旁和病理分级Ⅰ-Ⅱ级的癌组织中表达以胞核和胞浆明显,胞浆表达主要聚集在核周,病理分级分级Ⅱ-Ⅲ级及以上的癌组织中,P-Smad2表达则以核为主,差别有显著性(P＜0.05).③ PPM1A和P-Smad2在癌组织的表达部位呈现负相关性(r=-0.345,P=0.001).结论 PPM1A与P-Smad2在肝癌组织的胞核和胞浆表达转位及强度与其组织病理改变有密切关系,二者可能通过其相互作用,共同参与肝癌的发生发展机制.
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培哚普利对糖尿病大鼠肾组织内p-smad2及Ⅳ型胶原表达的影响
目的 探讨血管紧张素转化酶抑制剂培哚普利对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型肾组织Smad2活化形式p-smad2及Ⅳ型胶原蛋白表达的影响.方法 链脲佐菌素诱导的16只糖尿病大鼠模型,随机分为模型组和培哚普利治疗组,另以8只正常大鼠作为对照组.于24周末观察血糖、血压、24 h尿蛋白、肾重/体重.免疫组织化学检测肾组织p-smad2、Ⅳ型胶原蛋白表达.Western-blot检测大鼠肾组织p-smad2蛋白表达水平.结果 模型组和治疗组血糖明显高于正常组,但治疗组和模型组差异无显著性,模型组尿白蛋白水平均显著高于正常组,治疗组尿蛋白较模型组显著降低.免疫组化半定量结果示p-smad2蛋白在培哚普利治疗组较模型组表达显著减少,Ⅳ型胶原在培哚普利治疗组较模型组表达显著减少.Western-blot示p-smad2在治疗组较模型组显著减少.结论 培哚普利可以通过影响糖尿病大鼠肾脏内Smad2活化,从而下调Ⅳ型胶原表达来延缓糖尿病纤维化进程.
