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普氏文献资料
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用16S rRNA探针定量测定普氏立克次体在细胞内的繁殖量
目的 以普氏立克次体为研究对象,建立一种定量测定胞内微生物繁殖的方法.方法 从立克次体感染细胞提取总RNA为样品或用硫氰酸胍裂解感染细胞,以裂解物为样品,用32P标记的16S rRNA特异探针做RNA酶保护分析.根据探针分子结合数,计算出检测到的靶序列分子数,反映胞内微生物的繁殖量.结果 从0.5μl直接裂解物可检测到3.94×104个16S rRNA分子;从6pg的总RNA中可检测到5.82×104个16S rRNA分子.用本法试测立克次体在宿主细胞内的生长曲线,只表现出迟缓期及对数生长期,而无稳定期及衰退期.结论 用特异性探针通过RNA酶保护分析法可以定量测定胞内微生物在宿主细胞内的繁殖量.由本法测定到的普氏立克次体生长曲线表明难以沿用细菌的生长曲线来描述胞内微生物在宿主细胞内的生长过程.
