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基因1b型HCV核心蛋白不同功能区域对HepG2细胞生长的影响
目的 研究基因1b型丙型肝炎病毒(HCV)不同病毒株编码的核心蛋白(CORE):癌中心株(T)、癌旁株(NT)、C191(HCV-J6)及同一病毒株(T)编码的不同功能区域(1～172、1～126、1～58、59～126、127～172 AA)在HCV致病机制中的作用,为治疗HCV感染提供靶位.方法 将含有3个不同病毒株(T、NT及C191)及T不同功能区域的CORE真核表达质粒,转染到HepG2细胞,用流式细胞仪检测Annexin Ⅴ/PI,并用细胞生长实时观察仪观察细胞生长曲线.结果 基因1b型T、NT、C191和T不同功能区域的CORE均能诱导HepG2细胞凋亡和坏死且抑制了细胞的生长,其中,T诱导细胞凋亡和坏死及抑制细胞生长强于NT和C191, T的CORE的N端1～58 AA诱导细胞凋亡和坏死及抑制细胞生长均高于其他功能区域.结论 HCV基因1b型不同病毒株及同一病毒株编码的CORE不同功能区域的分子致病机制存在一定的差异,N端的1～58 AA在CORE的致病机制中起重要作用,可能是基因治疗的重要靶位之一.
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一种急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型的改良
目的 首次将共培养体系及混合腹水技术应用于急性胰腺炎腺泡细胞凋亡/坏死体外模型,并与常见的雨蛙素及雨蛙素联合脂多糖(LPS)模型进行对比研究,以观察其改良效果.方法 体外培养的大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J分为4组:对照组(培养液+PBS),雨蛙素组(培养液+10 nmol/L雨蛙素),雨蛙素+LPS组(培养液+10 nmol/L雨蛙素+10 mg/L LPS)及改良腹水组.改良腹水组采用牛黄胆酸钠诱导的重症急性胰腺炎动物模型腹水,混合后加入共培养体系,刺激体外培养的同源腺泡细胞造模.共培养体系的设置为:培养板中置入孔径为1μm的小室,以体积比1∶1于孔板和小室中分别加入培养液及混合腹水.各组刺激24 h后收集腺泡细胞,采用流式细胞术检测腺泡细胞的凋亡/坏死率,Western blot检测凋亡/坏死相关蛋白B淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、受体相互作用蛋白1(RIP1)的表达情况,透射电镜观察腺泡细胞的亚显微结构.结果 改良腹水模型中腺泡细胞以坏死特征为主,与其余3组相比,其凋亡率及坏死率均上调,RIP1及BAX蛋白表达水平上调,而Bcl-2蛋白呈下调趋势.透射电镜结果显示改良腹水组腺泡细胞细胞器结构破坏,细胞膜降解.而雨蛙素及雨蛙素+LPS模型与对照组相比,腺泡细胞凋亡率上调,坏死率无改变;促凋亡蛋白Bax表达升高,而RIP1蛋白的表达水平无显著上调.透射电镜结果显示雨蛙素及雨蛙素+ LPS组细胞染色质固缩成团,胞质降解,细胞膜完整,呈现出典型的凋亡特征.结论 相较于以腺泡细胞凋亡特征为主、研究轻症急性胰腺炎的雨蛙素及雨蛙素+ LPS模型,改良的腹水模型以腺泡细胞的坏死特征为主,是研究腺泡细胞坏死及重症急性胰腺炎的良好模型.
