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细胞内Ca2+在轮状病毒感染对Caco-2细胞NHE3蛋白调控中的作用
目的 研究轮状病毒(rotavirus,RV)感染对Caco-2细胞表面钠-氢(Na+-H+)交换蛋白3(NHE3)水平和生物活性的影响及其调控机制.方法 构建表达NHE3的Caco-2细胞模型,分为对照组(CTL组)、RV组、细胞内Ca2+络合剂BAPTA-AM组和BAPTA-AM+RV组,用BCECF-AM法和细胞表面NHE3生物素化法测定Na+-H+交换蛋白活性和细胞表面NHE3蛋白水平,Western blot测定细胞Cdc42蛋白水平.结果 与CTL组相比,RV感染可引起细胞Na+-H+交换蛋白活性以及细胞表面NHE3蛋白水平明显降低,此抑制作用可被BAPTA-AM拮抗,此外RV感染可引起Cdc42蛋白水平升高,这一作用也可被BATPA-AM拮抗.结论 RV感染对NHE3蛋白水平及生物活性的调控可能与细胞内Ca2+介导的Cdc42依赖性内吞途径有关.
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轮状病毒对NHE3蛋白水平及其生物活性的影响
目的 研究轮状病毒(RV)感染对表达NHE3的Caco-2细胞表面NHE3蛋白水平及其生物活性的影响.方法 构建表达NHE3的Caco-2细胞模型,构建好的表达HA-NHE3的单层极化Caco-2细胞分为CT组和RV组,分别加入等体积无血清培养液和RV病毒液(MOI10),在37℃、5％ CO2条件下孵育60min,进行检测.BCECF-AM法和细胞表面NHE3生物素化法测定Na+-H+交换活性和细胞表面NHE3蛋白水平.结果 Na+-H+交换活性检测结果显示,与CT组(0.412±0.026)相比,RV感染可引起细胞NHE3的生物活性明显降低(0.147±0.011) (P＜0.01).细胞表面NHE3生物素化法检测发现,CT组和RV组间细胞NHE3蛋白总量没有发生明显变化(0.727±0.037 vs0.732±0.020),差异无统计学意义(P＞0.05).然而,与CT组(0.374±0.015)相比,RV感染表达HA-NHE3的单层极化Caco-2细胞60 min后,细胞表面NHE3的表达明显降低(0.204±0.009),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 RV感染性腹泻可能与调控肠道细胞表面NHE3的蛋白水平及其生物活性有关.
