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肺炎链球菌在体外触发人肺Ⅱ型上皮细胞F-actin细胞骨架重排
目的通过体外实验研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae, S.pn)侵袭A549细胞和微丝肌动蛋白细胞骨架重排之间的关系. 方法采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察S.pn作用于A549细胞前后的F-actin细胞骨架重排情况;用F-actin细胞骨架重排抑制剂--细胞松弛素D预处理A549细胞,观察S.pn对A549细胞的侵袭率;分别使用PLC、TPK信号转导抑制剂U73122、Genistein处理因素预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排的关系. 结果 S.pn作用A549细胞后,F-actin细胞骨架呈块状、丝状聚集;F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D可明显降低S.pn 对A549细胞的侵袭率,在其浓度为0.25μg/ml时,未得到可测的细菌数;PLC(磷脂酶C)、TPK(酪氨酸蛋白激酶)信号转导途径抑制剂可部分抑制A549细胞F-actin细胞骨架重排,其相关系数分别为:rPLC=-0.88(P＜0.05);rTPK=-0.91(P＜0.05).S.pn细胞壁作用A549细胞后,F-actin细胞骨架呈块状、丝状聚集,二者间存在剂量依赖关系. 结论 S.pn可通过PLC、TPK细胞信号转导途径触发A549细胞F-actin细胞骨架重排,进而导致S.pn侵袭A549细胞.
关键词： 肺炎链球菌 肺Ⅱ型上皮细胞(A549) 细胞骨架 信号转导 侵袭 -
肺炎链球菌触发人肺Ⅱ型上皮细胞F-actin细胞骨架重排与TPK信号转导的相关性研究
目的:通过体外实验,研究Streptococcus pneumoniae(S.pn)是否通过肺Ⅱ型上皮细胞(A549)酪氨酸蛋白激酶(TPK)信号转导途径触发微丝肌动蛋白(Filamentous actin,F-actin)细胞骨架重排,进而导致S.pn对A549细胞的侵袭.方法:采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察S.pn作用A549细胞前后的F-actin细胞骨架重排情况,依照重排百分率得分标准以(%)表示;用F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松驰素D预处理A549细胞,观察S.pn对A549细胞的侵袭率;使用TPK信号转导抑制剂Genistein预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排百分率间是否存在剂量依赖关系.结果:S.pn作用A549细胞后,经FITC-phalloidin荧光染色,F-actin细胞骨架呈块状、丝状聚集;F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松驰素D可明显降低S.pn对A549细胞的侵袭率,在其浓度为0.25μg/ml时,未得到可测的细菌数;TPK信号转导途径抑制剂可部分抑制A549细胞F-actin细胞骨架重排,并与F-actin细胞骨架重排百分率间存在量效关系,其相关系数分别为rTpK=-0.91(P＜0.05).结论:上述结果提示S.pn可通过TPK细胞信号转导途径触发A549细胞F-actin细胞骨架重排,进而导致S.pn侵袭A549细胞.
关键词： 肺炎链球菌 肺Ⅱ型上皮细胞(A549) 细胞骨架 TPK信号转导 -
小檗碱对肺炎链球菌侵袭A549细胞的保护作用
目的：通过体外实验，研究小檗碱是否对肺炎链球菌（Streptococcus pneumonia，S．pn）侵袭人肺Ⅱ型上皮细胞（A549）有保护性抑制作用。方法：用不同浓度的小檗碱预处理 A549细胞，并与 S．pn 一起与A549细胞共同作用，通过用0．025％的 Triton X-100裂解细胞，然后将稀释后的裂解液涂布 TSAB 平板，培养过夜，计数平板上的菌落数。结果：小檗碱的浓度为0，25，50，100，200μg/mL 时，S．pn 对24孔板上每孔A549细胞的侵袭数分别为52±21，29±11，13±10，0，0；在其浓度终浓度为100μg/mL时，未得到可测的细菌数。结论：小檗碱可抑制S．pn 侵袭A549细胞，两者间存在剂量依赖关系。
关键词： 肺炎链球菌 肺Ⅱ型上皮细胞(A549) 侵袭
