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豚草花粉泛过敏原同源基因克隆与序列分析
目的克隆豚草花粉泛过敏原同源基因. 方法采用生物信息学分析方法对众多的花粉过敏原基因进行序列同源性比较,以序列保守区域为依据设计合成简并引物,在特殊的RT-PCR条件下,结合RACE技术对豚草花粉中的过敏原全长基因进行克隆;通过Northern杂交及序列分析初步确定基因产物是否为花粉过敏原. 结果获得了3个新的全长基因.序列分析显示:所得过敏原同源基因与数十种不同种属来源的过敏原肌动蛋白结合蛋白(profilin)具有较高的同源性,初步认定其为泛过敏原,并暂命名为Amb a 8(t).Northern杂交证实该基因在花粉中表达. 结论采用本研究方法成功地在豚草花粉中克隆到3个泛过敏原基因,为豚草花粉重组过敏原的蛋白质表达及标准化奠定了物质基础.
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抗HIV-1 gp120人源mAb重链CDR区分子特性分析
目的:分析gp120表面不同抗原决定簇诱导产生的人抗体重链可变区序列,探讨各类抗体胚系基因家族利用率、CDRs残基利用率及平均pI值与其空间结构和生物学功能的关系. 方法:收集人抗gp120抗体重链可变区序列,按照序列的标注将其分至不同表位组并建立相关数据库. 将其与Kabat数据库中的所有人源抗体进行比较,统计不同表位组抗gp120抗体的家族利用率、残基利用率以及不同位点的平均pI值的差别,并用SWISS-MODEL工具进行结构验证. 结果:人抗gp120抗体中VH1家族利用率高,约占49%,较普通人群的22%显著增高. 各表位组间的残基利用差别主要集中于CDR2区,且以CD4i组与V3组间的残基利用率差异为显著. 结论:人抗gp120抗体一级序列所蕴含信息的不同,直接决定了其三级结构和生物功能的差异. 这些序列差异的发现,将为以后通过抗体改造提高该类抗体特异性和亲和力提供一定的参考信息.
