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孕期弓形虫感染对小鼠胎盘补体调节蛋白表达水平的影响
目的 通过检测弓形虫感染对C57BL/6孕鼠胎盘补体调节蛋白的表达水平,探索孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子免疫机制.方法 将C57BL/6孕鼠随机分为感染组和正常对照组,每组12只,感染组每只孕鼠于孕8 d腹腔注射200个弓形虫强毒株(RH株)速殖子,对照组于相应时间注射等量生理盐水.所有孕鼠均于孕14 d无菌分离胚胎组织,观察胎鼠发育情况.采用实时荧光定量PCR检测胎盘补体调节蛋白Crry、GPI-DAF及CD59a的mRNA的表达水平;采用流式细胞术检测胎盘单细胞悬液中Crry、GPI-DAF阳性细胞率.结果 弓形虫感染导致感染组死胎率显著升高(感染组死胎率为80.95%,对照组为4.41%),两组之间差异有统计学意义(P＜0.01);弓形虫感染组及对照组Crry、GPI-DAF和CD59a的mRNA表达水平分别为0.786±0.199、0.594±0.096、0.880±0.179和0.550±0.077、0.221±0.074、0.591±0.075,3类补体调节蛋白感染组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);感染组和对照组Crry、GPI-DAF的阳性细胞百分率分别为(10.03±2.11)%、(2.95±1.04)%和(3.15±1.32)%、(0.66±0.26)%,两类补体调节蛋白感染组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 弓形虫感染导致孕鼠胎盘3种补体凋节蛋白Crry、GPI-DAF及CD59a表达水平均升高,打破了母胎界面维持正常妊娠所需的免疫微环境,这可能是孕期弓形虫感染致不良妊娠结局的分子免疫机制之一.
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刚地弓形虫感染对小鼠外周血和脾淋巴细胞Crry和CD55表达的影响
目的 探讨刚地弓形虫急性感染对小鼠外周血细胞和脾淋巴细胞表面补体调节蛋白Crry和CD55表达的影响.方法 将30只雄性C57BL/6小鼠按完全随机分组法分为感染组(20只)和对照组(10只).感染组小鼠每只腹腔注射1.0×104个RH株刚地弓形虫速殖子,对照组注射等量生理盐水.感染组依次于感染后2d和5d采集标本,同时对对照组取材.采用流式细胞仪检测小鼠外周血红细胞、白细胞及脾淋巴细胞Crry与CD55的表达情况.结果 ①感染后2d小鼠外周血红细胞Crry和CD55阳性表达率依次为(96.17±2.86)％和(65.23±4.99)％,对照组依次为(98.24±0.83)％和(68.57±5.31)％,组间差异均无有统计学意义；感染后5d,其红细胞Crry和CD55阳性率依次为(81.77±4.51)％、(51.72±8.29)％,对照组依次为(97.94±0.95)％、(70.57±6.44)％,感染组较对照组降低(t=7.786,t=4.433,P＜0.01).②感染后2d,白细胞Crry和CD55阳性率依次为(96.74±3.76)％、(71.80±6.74)％,对照组依次为(97.25±1.16)％、(74.84±3.87)％,两组比较均无有统计学意义的差异；感染后5d,其阳性率依次为(93.46±4.38)％、(59.67±6.37)％,对照组依次为(97.47±1.56)％、(75.10±4.58)％,感染组比对照组降低(t=2.585,t=4.792,P＜0.05,P＜0.01).③感染后2d,脾淋巴细胞Crry和CD55阳性率依次为(97.74±1.55)％和(66.58±2.67)％,对照组依次为(98.20±1.19)％和(69.98±4.62)％,两组比较均无有统计学意义的差异；感染5d后,其阳性率依次为(94.71±3.59)％、(56.86±6.98)％,对照组依次为(98.24±1.63)％、(71.18±4.09)％,其中,感染组CD55阳性率较对照组降低(t=4.195,P＜0.01),而Crry阳性率较对照组无有统计学意义的差异.结论 小鼠感染刚地弓形虫RH株后,不会立刻影响外周血和脾淋巴细胞补体调节蛋白Crry、CD55表达水平；随着病情发展,刚地弓形虫感染可导致机体免疫细胞补体调节蛋白的表达水平降低,但对不同免疫细胞各补体调节蛋白影响程度并不相同.
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弓形虫主要表面抗原1核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫保护作用的研究
目的研究刚地弓形虫RH株主要表面抗原1(P30)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用.方法根据弓形虫P30基因的DNA序列设计一对引物,,将PCR扩增到的P30基因克隆到真核表达载体pcDNA.3.1中.大量制备pcDNA3.1-P30和pcDNA3.1质粒DNA.将48只BALB/c小鼠随机分成4组,每组12只,空质粒对照组(A组)第0、2、4周经小鼠股四头肌注射100 μg pcDNA3.1质粒DNA;重组P30抗原免疫组(B组)第0、2、4周每鼠经背部皮下多点注射50 μg rP30+福氏完全佐剂; P30 DNA疫苗免疫组(C组)第0、2、4周经小鼠股四头肌注射100 μg pcDNA3.1-P30质粒DNA;P30 DNA疫苗和重组P30抗原联合免疫组(D组)第0、2周经小鼠股四头肌注射100 μg pcDNA3.1-P30质粒DNA,第4周每鼠经背部皮下多点注射50 μg rP30+福氏完全佐剂.末次免疫4周后每鼠用100个弓形虫速殖子经腹腔感染,观察小鼠存活时间.结果成功构建刚地弓形虫RH株P30DNA疫苗,动物保护性实验表明,虽然与对照组相比实验组小鼠的存活时间有一定的延长,但差异无显著性.结论 pcDNA3.1-P30 DNA疫苗具有弓形虫病候选DNA疫苗分子的潜力.
