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T7RNA聚合酶真核表达质粒的构建及其病毒拯救功能的鉴定
目的 建立T7RNA聚合酶真核表达质粒细胞内病毒拯救系统.方法 利用分子生物学技术,以大肠埃希菌BL21(DE3)的T7RNA聚合酶基因为目的 基因,构建T7RNA聚合酶真核表达质粒VR-1a并鉴定,然后将VR-1a和EV71病毒感染性克隆质粒共转染Vero细胞并传代,观察其细胞病变,同时用RT-PCR检测EV71病毒核酸和用ELISA检测EV71病毒抗原.结果 酶切和测序显示成功构建T7RNA聚合酶真核表达质粒VR-1a,和EV71病毒感染性克隆共转染Vero细胞后出现明显的病变,RT-PCR检测EV71病毒核酸阳性并测序证实,ELISA检测显示有EV71病毒抗原.结论 此方法可以用于细胞内拯救EV71病毒,有望应用于EV71病毒的核酸疫苗免疫研究.
关键词： DNA指导的RNA聚合酶 肠道病毒属 转染 -
猪囊尾蚴RNA聚合酶亚基基因的筛选及结构初探
目的从构建的剪切引导序列(SL)cDNA文库中筛选猪囊尾蚴相关基因.方法提取猪囊尾蚴总RNA,利用SL特异序列和带有噬菌体M13M4的olig(dT)为引物,反转录成cDNA,构建猪囊尾蚴SL cDNA文库.随机筛选并通过酶切、PCR鉴定阳性克隆,分析其同源性.结果鉴定出一332 bp的插入片段,含有204 bp的开放阅读框(ORF)和3′端20 bp的poly A尾巴,经核苷酸和氨基酸序列分析,所克隆的基因的氨基酸序列与其他真核生物如人、秀丽隐杆线虫、果蝇及拟南芥等的RNA聚合酶亚基基因同源性均高达71.6%以上.结论筛选鉴定的基因推测为猪囊尾蚴RNA聚合酶亚基基因,而且在不同物种间很保守.
关键词： 囊尾蚴 剪接前导 基因文库 DNA指导的RNA聚合酶 -
一种乙型肝炎病毒转录后调节基序的体外合成方法
目的探索T7 RNA聚合酶体外转录方法制备乙型肝炎病毒(HBV)转录后调节基序(HPRE).方法用聚合酶链反应法从含HBV全基因组的模板中扩增HBV HPRE基因,重组入pGEM-11zf载体,并用T7 RNA聚合酶对其进行体外转录.结果成功地构建含HPRE基因的重组质粒,并成功地用体外转录方法制备了高纯度的HPRE.结论 T7 RNA聚合酶体外转录方法可用于制备高纯度的HPRE,为以后的深入研究奠定了基础.
关键词： 肝炎病毒 乙型 DNA指导的RNA聚合酶 体外转录 HBV转录后调节基序
