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细胞酸化对K562/A02耐药细胞株中P-糖蛋白的影响
本研究探讨细胞酸化对K562/A02细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multidrug resistance,MDR)提供新方法.利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定K562及K562/A02细胞内pH值(intracellular pH,pH,);采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/A02细胞中P-gp功能的影响;分别采用Western blot及实时定量RT-PCR技术检测P-gp的蛋白表达水平和mRNA表达水平的变化.结果表明:细胞酸化3小时对K562及K562/A02细胞的活力影响较小.在K562/A02细胞中,P-gp的功能随pH1的降低而减弱,细胞酸化明显增加了细胞对罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)的累积,并抑制了P-gp介导的Rh123外排.细胞酸化还分别在蛋白水平和mRNA水平抑制了K562/A02细胞中P-gp的表达,并且这种抑制具有pH1及时间的依赖性.结论:细胞酸化能够抑制K562/A02耐药细胞株中P-gp的表达和功能.
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细胞内酸化逆转HL-60、MSC和脐血CD34+细胞耐药的研究
本研究主要探讨细胞酸化对罗丹明123(rhodamine Rh123)在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中累积的影响,为抗白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)寻找胞内酸化逆转的新方法.采用实时定量PCR技术检测MDR1基因在mRNA水平的表达;利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定HL-60、MSC及CD34+脐血细胞pHi值;采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞内Rh123累积的影响.结果表明:细胞酸化3小时对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞的活力无明显影响,细胞酸化能明显改变细胞对Rh123的累积;此外,细胞分化程度越低,其细胞内Rh123的累积越少.结论:细胞酸化能逆转HL-60、MSC和脐血CD34+细胞的耐药.
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细胞酸化在癫痫终止中的可能作用机制
癫痫尤其是癫痫持续状态(SE),是一种严重危害人类健康的常见疾病.目前对癫痫发作和维持机制研究较多,但对癫痫如何终止却知之甚少.20世纪初已发现适度的细胞酸化可减缓或抑制癫痫患者的惊厥样发作.近年来许多研究证实,细胞酸化引起癫痫发作终止的机制与抑制性和兴奋性神经递质失衡、酸敏感性离子通道开放等机制密切相关.因此,与之相关的靶向药物和治疗手段将成为探索癫痫治疗的发展方向之一.
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Cariporide降低K562/DOX细胞株表达P-糖蛋白而逆转耐药的影响
目的 探讨cariporide对耐药细胞株K562/DOX中P-糖蛋白(P-glycopmtein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multidrug resistance,MDR)提供新方法.方法 应用cariporide对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定野生型细胞系K562及耐药细胞株K562/DOX细胞内pH值及细胞酸化对K562和K562/DOX细胞内阿霉素累积的影响.采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响.应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/DOX细胞中P-gP功能的影响.采用实时定量RT-PCR技术检测MDRI基因在mRNA表达水平的变化.结果 Cariporide处理3 h对K562及K562/DOX细胞的活力影响较小.在K562/DOX细胞中,P-gp的外排药物能力随细胞内pH值的降低而减弱,cariporide明显增加了细胞对罗丹明123(rhodaminel 123,Rh123)和阿霉素的累积.细胞酸化还在mRNA水平抑制了K562/DOX细胞中P-gp的表达.结论 Cariporide能够抑制K562/DOX耐药细胞株中MDRI基因表达和P-gp的功能.
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氨氯吡咪诱导白血病K-562细胞酸化及凋亡研究
目的 研究氨氯吡咪诱导白血病细胞株K-562细胞酸化及凋亡的作用.方法 采用荧光探针法检测氨氯吡咪对人白血病细胞株K-562细胞的酸化作用;采用流式细胞仪观察氨氯吡咪对K-562细胞周期的影响及诱导细胞凋亡的情况.结果 与0 h相比,100 μmol·L-1氨氯吡咪处理8 h即能明显酸化K-562细胞,细胞内pH明显降低(P<0.05).与0 μmol·L-1比较,除50 μmol·L-1氨氯吡咪处理K-562细胞24 h后G1期细胞增加差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各浓度氨氯吡咪处理K-562细胞24 h后G1.期细胞增加(P<0.01),S期细胞降低(P<0.01),G2/M期细胞也有所增加(P<0.05).与0 μmol·L-1相比,其余各浓度氨氯吡咪对K-562细胞处理24 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01).与0 h相比,100 μmol·L-1氨氯吡咪对K-562细胞处理8、24、48 h凋亡细胞比率均明显增加(P<0.01).结论 氨氯吡咪可有效酸化K-562细胞,使细胞内pH显著降低,并诱导K-562细胞凋亡,肿瘤细胞的增殖生长也显著受到抑制,在自血病治疗中可能具有一定的应用前景.
