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MAPK途径磷酸化在胰岛素样生长因子-1促进人骨髓瘤细胞株KM3增殖中的作用
本研究探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人骨髓瘤细胞株KM3增殖的影响以及MAPK途径磷酸化在该过程中的作用.采用流式细胞术检测不同浓度的重组人IGF-1处理后KM3细胞周期的变化,Western blot法检测细胞内MAPK信号转导途径主要分子Erk1/2磷酸化在IGF-1刺激及PD98059特异性抑制作用下的改变,TUNEL法检测特异性阻断Erk1/2磷酸化在抑制KM3细胞增殖和诱导凋亡中的作用.结果表明,IGF-1可以显著提高S期和G2/M期的KM3细胞比率和细胞内Erk1/2分子的磷酸化水平,阻断IGF-1引起的Erk1/2磷酸化可以显著抑制KM3细胞的增殖并引起其凋亡.结论:IGF-1引起的Erk1/2分子磷酸化在KM3细胞增殖过程中起着十分重要的作用.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 MAPK途径 Erk1/2磷酸化 骨髓瘤 -
新型噻唑并三嗪类化合物R001抑制ERK1/2磷酸化的抗肿瘤作用
目的:探讨噻唑并三嗪类化合物R001对ERK1/2磷酸化的影响及其抗肿瘤活性.方法:采用基于U2OS-EGFP细胞的荧光分析法和MTT法检测化合物R001对U2OS-EGFP-4F12G和U2OS、T47D、SKOV3、MCF7等其他肿瘤细胞增殖的影响；采用电子显微镜观察化合物R001对MCF7、T47D、U2OS-EGFP-4F12G和SKOV3等多种肿瘤细胞株增殖的抑制作用；采用流式细胞术检测化合物R001对MCF7、U2OS-EGFP-4F12G和SKOV3等多种肿瘤细胞周期的影响；采用免疫印迹法检测检测化合物R001对ERK1/2磷酸化的影响.结果:基于U2OS-EGFP细胞的荧光分析法显示,化合物R001抑制U2OS-EGFP-4F12G细胞增殖的IC50值为11.58 μM;MTT法显示,化合物R001对U2OS、T47D、SKOV3、MCF7等多种肿瘤细胞增殖的影响具有剂量依赖性；电子显微镜观察显示,化合物R001可以引起MCF7、SKOV3和U2OS-EGFP-4F12G三种肿瘤细胞的数量和形态变化；流式细胞术显示,化合物R001可将MCF7、U2OS-EGF-4F12G和SKOV3等肿瘤细胞阻断在S期；免疫印迹试验显示,化合物R001可以有效抑制SKOV3和U2OS细胞中ERK1/2的磷酸化.结论:噻唑并三嗪类化合物R001通过抑制ERK1/2磷酸化而发挥抗肿瘤作用.
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尾加压素Ⅱ对自发性高血压大鼠胸主动脉的收缩效应及其对血管平滑肌细胞内ERK1/2磷酸化的影响
目的 观察尾加压素Ⅱ(U-Ⅱ)对不同血压水平的自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉的收缩效应和U-Ⅱ对血管平滑肌细胞(VSMC)内ERK1/2和p38MAPK磷酸化的影响,以进一步明确U-Ⅱ对SHR的血管效应及其可能机制.方法 离体血管灌流实验测定U-Ⅱ对胸主动脉张力的影响,采用免疫荧光标记UT受体在VSMC的表达,并通过蛋白质印迹的方法观察U-Ⅱ对VSMC内ERK1/2和p38MAPK磷酸化的作用.结果 U-Ⅱ受体分布在VSMC上,累积浓度的U-Ⅱ对成年SHR去除内皮的胸主动脉环收缩效应明显强于WKY大鼠;在VSMC细胞内,U-Ⅱ可以浓度依赖性地激活VSMC内ERK1/2磷酸化,但对p38MAPK没有作用;ERK1/2阻断剂的应用不能阻断(肌凝蛋白轻链)MLC的磷酸化.结论 U-Ⅱ对SHR离体血管表现出较强的收缩作用,可能通过ERK1/2及p38MAPK以外的其他通路参与了MLC的磷酸化以及VSMC的收缩效应.
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右心室心尖部起搏对 Beagle 犬心室肌ERK1/2磷酸化水平的影响
目的：探讨右心室心尖部起搏对Beagle犬心室肌电重构及细胞外信号调节激酶（ERK）1/2磷酸化水平的影响。方法成年雄性Beagle犬12只，年龄3~4年，体重20~24kg，随机分为对照组（n=6）和起搏组（n=6），均植入DDD起搏器后程控至关闭状态，起搏组术后1周时开启起搏器并使心室起搏大化。于术前及术后1周、4周关闭起搏器后行心电图及超声心动描记术检查，术后4周时处死动物，观察心肌病理结果，采用免疫印迹法检测犬右心室心肌总ERK1/2及其磷酸化水平的变化。结果两组心室肌病理及超声心动描记术、心率、QRS时间、总ERK1/2的表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）；与对照组相比，术后4周时起搏组Tp- e间期、Q- T间期均增大，p- ERK增多（均P＜0.05）。结论右心室心尖部起搏可以导致心肌复极延长及促进心肌ERK1/2的磷酸化。
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晚期糖基化终末产物激活ERK1／2信号通路参与人主动脉血管平滑肌细胞增殖
目的：探究细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）磷酸化在晚期糖基化终末产物（AGEs）刺激下人主动脉血管平滑肌细胞（HAVSMCs）增殖的作用。方法：CCK8法检测不同浓度 AGEs 对 HAVSMCs 增殖及PD98059对AGEs诱导的HAVSMCs增殖的影响。流式细胞仪检测经相应处理后细胞周期转换。Western Blot检测相关蛋白表达。结果：10 mg／L AGEs 显著促进了HAVSMCs的增殖和DNA合成；PD98059（40μmol／L）能显著抑制AGEs诱导的HAVSMCs增殖及其周期的演进。 p－ERK1／2，PCNA受AGEs 调控，表现出时间和剂量依赖性。结论：AGEs激活ERK1／2信号通路参与HAVSMCs增殖。
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阻断PD-L1在增强奥沙利铂治疗原发性肝细胞肝癌疗效中的实验研究
目的 初步探讨阻断程序性死亡-配体1 (programmed death-ligand 1,PD-L1)在增强奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)治疗原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)疗效中的作用及其分子机制.方法 L-OHP处理人HCC细胞系HepG2后,qRT-PCR和Western blot检测PD-L1在mRNA及蛋白水平的表达变化,以及细胞外调节蛋白激酶1/2 (extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)磷酸化水平的改变;建立Hepa1-6细胞C57BL/6J小鼠HCC移植瘤模型,随机分为对照组、L-OHP组、PD-L1单抗组、L-OHP+PD-L1单抗组,计算处理后各组小鼠肿瘤的质量、抑制率和生存时间;体外刺激或抑制HepG2细胞系ERK1/2的磷酸化,L-OHP处理后qRT-PCR和Westem blot检测PD-L1的表达变化.结果 L-OHP能显著抑制HepG2细胞系的生长,其ICs0分别为20.94 mg/L;L-OHP处理HepG2细胞后,p-ERK1/2和PD-L1的表达量均高于对照组(P＜0.05).小鼠HCC移植瘤模型中,与对照组、L-OHP组和PD-L1单抗组相比较,L-OHP+PD-L1单抗组的肿瘤质量显著减小(P＜0.05),肿瘤抑制率大幅提升(P＜0.05),生存时间明显延长(P＜0.05).体外刺激ERK1/2的磷酸化后,PD-L1表达显著上调,而抑制HCC细胞株ERK1/2的磷酸化后,L-OHP诱导PD-L1表达升高效应明显受到抑制.结论 L-OHP能通过提高ERK1/2磷酸化水平上调HCC细胞的PD-L1表达,从而导致治疗失败,而联合PD-L1单抗可显著增强L-OHP的抗HCC作用.
