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Ahi-1基因导入Jurkat细胞中表达及功能的研究
本研究目的是探讨Ahi-1基因及其编码蛋白在人T淋巴细胞白血痛Jurkat细胞中的表达、细胞内定位以及Ahi-1基因对Jurkat细胞生长的调控作用.分别应用Northern blot、Wemtem blot检测Ahi-1基因的mRNA及蛋白表达水平.构建Ahi-1的真核表达质粒并导入Jurkat细胞,用G418筛选获得稳定过表达Ahi-1基因的Jurkat-A细胞,用XTT法检测细胞的增殖活性,半固体培养法检测细胞集落形成能力.结果表明:正常人外周血淋巴细胞(PBL)、Jurkat细胞以及HUT78细胞均表达6.5、4.2以及2 kb的Ahi-1基因mRNA转录本.PBL及Jurkat细胞均表达140 kD的Ahi-1蛋白且主要定位于细胞浆内,但在细胞核内未见表达.PBL尚表达120 kD的Ahi-1蛋白,主要存在于细胞核内,Jurkat细胞中120 kD的Ahi-1蛋白表达水平低下.甲异靛、阿糖胞苷(Ara-C)、高三尖杉酯碱(HHT)、甲氨喋呤(MTX)以及鬼臼乙叉甙(VPl6)可诱导Jurkat细胞核内140 kD的Ahi-1蛋白表达增强,甲异靛降低细胞浆内Ahi-1蛋白表达.与转染质粒对照Jurkat细胞(Jurkat-C)相比,高表达外源性Ahi-1的Jurkat-A细胞的生长及集落形成能力显著低于Jurkat-C细胞;细胞总c-myb蛋白表达水平无改变,但Jurkat-A细胞中磷酸化c-myb蛋白表达增强;细胞中AKT磷酸化水平无明显变化.结论:Jurkat细胞表达6.5、4.2以及2 kb的Ahi-1转录本;140kD的Ahi-1蛋白主要定位于细胞浆中,多种化疗药物可诱导细胞核内140 kD的Ahi-1蛋白表达增强;过表达外源性全长Ahi-1可抑制Jurkat细胞的生长及集落形成能力,并诱导c-myb蛋白磷酸化.
