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RevTet-On系统文献资料
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RevTet-On系统调控血小板生成素基因表达的研究
本研究应用RevTet-On基因表达系统,通过四环素衍生物强力霉素(doxcycline,Dox)调控血小板生成素(TPO)基因在NIH3T3细胞中的表达.首先应用基因重组技术构建含TPO基因的重组质粒pRevTRE/TPO,然后将RevTet-On基因调控系统的pRevTet-On和pRevTRE/TPO分别转染PT67细胞,从而包装RevTet-On和RevTRE/TPO重组逆转录病毒,同时将此两种病毒感染NIH3T3细胞,建立整合入RevTet-On和RevTRE/TPO逆转录病毒的阳性细胞株(RevTet-On3T3/TPO).通过Dox调节TPO基因在此细胞株中表达,培养基中加入2 mg/L Dox或不加Dox,然后用RT-PCR,Western印迹和ELISA方法检测TPO基因表达情况.结果发现,RevTet-On3T3/TPO当培养基中不加Dox时用RT-PCR和Western印迹检测未见TPO表达,用ELISA检测表达TPO量低;在培养基中加入Dox时,RT-PCR和Western印迹检测可见TPO表达,且TPO表达量高,为不加Dox时的91倍.本实验表明,通过建立逆转录病毒整合的NIH3T3细胞株,利用四环素及其衍生物Dox调节TPO基因的表达,为TPO基因治疗的进行提供了有用的工具.
关键词： RevTet-On系统 血小板生成素 基因表达 NIH3T3细胞
