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阻断B7/CD28及CD40/CD154共刺激信号对致敏小鼠免疫功能的影响
本研究旨在通过阻断致敏小鼠的B7/CD28及CD40/CD154共刺激信号途径,探讨其免疫功能的变化,为应用于异基因骨髓移植的免疫耐受提供实验依据.将致敏的BALB/c小鼠分成4组:①CTLA4Ig+ anti-CD154鼠源性同型对照抗体;②anti-CD154单克隆抗体+CTLA4Ig鼠源性同型对照抗体;③CTLA4Ig+ anti-CD154单克隆抗体;④CTLA4Ig及anti-CD154单克隆抗体的鼠源性同型对照抗体.正常BALB/c小鼠应用CTLA4Ig及anti-CD154单克隆抗体的鼠源性同型对照抗体.给予每只小鼠CTLA4 Ig和anti-CD154单克隆抗体或相对应的同型对照抗体各500 μg,于移植前7天尾静脉输注,每组小鼠各5只.移植当天处死各组小鼠,应用流式细胞仪检测脾细胞中CD19+ CD69+B细胞数量、CD44high/CD62Lhigh及CD44high/CD62Llow/-T细胞数量.用流式细胞仪或ELISA法检测血清中抗体及细胞因子的变化.结果表明:小鼠致敏后CD19+ CD69+B细胞数量与正常小鼠相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01),阻断B7/CD28或/和CD40/CD154共刺激信号通路后可见抑制效应(P＜0.01),两者同时阻断具有协同作用(P＜0.01).小鼠致敏后记忆性T细胞CD44high/CD62Lhigh及效应性T细胞CD44high/CD62Llow/-与正常相比亦明显增多(P＜0.01).阻断共刺激信号通路后可使其明显抑制,CTLA4 Ig和anti-CD154单克隆抗体联合应用具有协同效应(P＜0.01).各组小鼠细胞因子及IgG、IgM抗体均无明显差异(P＞0.05),但血清中致敏抗体检测显示致敏后特异性抗体升高,阻断共刺激信号通路后其明显被抑制(P＜0.01).结论:阻断B7/CD28或CD40/CD154共刺激信号途径均能抑制致敏小鼠的细胞免疫功能及体液免疫功能;同时阻断有协同作用.
关键词： 共刺激信号 B7/CD28 致敏 CTLA4 IgG anti-CD154 -
真核表达载体pcDNA3-CTLA4Ig转染小鼠对移植胰岛功能的影响
目的:探讨真核表达载体pcDNA3-CTLA4Ig转染受体小鼠肌细胞后对胰岛移植后排斥反应的影响.方法:受体C57BL/6小鼠随机分为对照组、空白转染组和实验组(转染pcDNA3-CTLA4Ig).Western blot检测受体小鼠血清CTLA4-Ig表达,观察移植物存活时间,术后7 d取受体肾脏做HE染色及胰岛素免疫组化染色,采用微量全血3H-胸腺嘧啶掺入法检测单个核细胞在刀豆蛋白A刺激下的增殖程度,流式细胞仪检测外周血T细胞亚群表达情况.结果:受体小鼠转染5 d后,Western blot检测到血清内有CTLA4Ig表达,转染效率为27.50%;实验组小鼠血糖维持正常时间明显延长(P＜0.05);术后7 d,转染组单个核细胞在刀豆蛋白刺激下的增殖程度明显降低(P＜0.05),CD4+、CD8+T淋巴细胞表达与对照组和空白转染组相比有显著差异差异(CD4+:14.38%±0.84% vs 20.56%±0.68%,21.04%±1.14%,P＜0.05;CD8+:14.77%±0.92% vs 24.63%±1.30%,23.84%±1.21%,P＜0.05),小鼠肾被膜下胰岛素免疫组化染色强度明显增高.结论:利用脂质体法可将pcDNA3-CTLA4Ig转染到活体小鼠肌细胞内并在小鼠体内表达CTLA4Ig,从而阻断B7/CD28共刺激信号途径,抑制胰岛移植术后排斥反应.
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057 支气管哮喘与T细胞激活信号
B7/CD28共刺激分子是T细胞激活的第二信号,此信号无抗原特异性;近年来研究发现阻断此共刺激途径可抑制TH0向TH2转化,减少TH2类细胞因子生成,从而减轻支气管哮喘(哮喘)的气道炎症及气道高反应性等症状;通过阻断B7/CD28结合可能为哮喘提供一条更有前途的治疗途径.
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CTLA-4Ig融合蛋白抑制apoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化机理研究
目的 探讨CTLA-4Ig融合蛋白抑制高脂饮食饲养的载脂蛋白E基因缺陷小鼠(apoE-/-)动脉粥样硬化(AS)的作用机理.方法 30只10周龄apoE-/-小鼠,随机分为3组(每组10只),高脂饮食饲养,分别采用CTLA-4Ig、IgGI、PBS腹腔注射(每周2次).12周后取小鼠主动脉进行病理学检查,检测AS病变相关指标.包括斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比,斑块内脂质、胶原和平滑肌细胞含量;取血清检测总胆固醇浓度和CRP、sICAM-1、IFN-γ、IL-10、TGF-β1浓度.结果高脂饮食饲养12周后,形成明显AS斑块,但CTLA-4Ig组病变轻.CTLA-4Ig组、IgG1组和PBS组的斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比、斑块内脂质含量和胶原含量差异均有统计学意义(P<0.05),CTLA-4Ig组斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比和斑块内脂质含量均显著低于IgG1组和PBS组(P<0.05),其斑块内胶原含量高于IgG1组和PBS组(P<0.05),而后2组间上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05);3组间斑块内平滑肌细胞含量差异不具有统计学意义(P>0.05).CTLA-4Ig组、IgG1组和PBS组的血清总胆固醇浓度差异不具有计学意义(P>0.05),3组的血清CRP、sICAM-1、IFN-γ、IL-10、TGF-β1水平差异均有统计学意义(P<0.05),CTLA-4Ig组血清CRP、sICAM-1、IFN-γ水平降低,血清IL-10、TGF-β1水平升高,而后2组间上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CTLA-4Ig融合蛋白抑制高脂饮食饲养的apoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化进程,可能与阻断B7/CD28通路、抗炎作用、促进Th2极化、及影响调节性T细胞功能等有关.
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CTLA-4Ig融合蛋白对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化的抑制作用
[目的] 探讨CTLA-4Ig融合蛋白对高脂饮食饲养的载脂蛋白E基因缺陷小鼠(ApoE-/-)动脉粥样硬化病变的抑制作用.[方法] 25只10周龄ApoE-/-小鼠,高脂饮食饲养4周后,随机取5只验证AS病变(对照组);剩余20只随机分为4组(每组5只),继续高脂饮食饲养,分别采用CTLA-4Ig、PBS、IgG1腹腔注射,第4组不予处理;8周后取小鼠主动脉进行病理学检查,检测AS相关指标,包括斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比,斑块内脂质、胶原和平滑肌细胞含量.[结果] 高脂饮食饲养4周后,出现明显AS病变.继续高脂饮食饲养8周,形成典型AS斑块,CTLA-4Ig组、PBS组、IgG1组和空白组的斑块面积/管腔面积比分别为0.27 ± 0.08、0.40 ± 0.08、0.43 ± 0.08和0.46 ± 0.10,较4周时(0.05 ± 0.01)明显增加(P ＜ 0.05),4组的血管内膜/中膜厚度比分别为2.6 ± 0.6、6.0 ± 0.9、5.7 ± 0.8和5.9 ± 0.6,高于对照组(0.5 ± 0.1,P ＜ 0.05),4组斑块内脂质含量(%)分别为26.0 ± 3.0、40.8 ± 5.7、40.6 ± 3.0和43.2 ± 5.7较4周时明显增加(7.2 ± 1.4,P ＜ 0.05 ).采用CTLA-4Ig进行干预后,其斑块面积/管腔面积比、血管内膜/中膜厚度比和斑块内脂质含量显著低于PBS、IgG1和空白处理组(P ＜ 0.05),而后3组间上述指标的差异无统计学意义(P ＞ 0.05);CTLA-4Ig组斑块内胶原含量(16.0 ± 1.1)% 高于其他3组[(8.6 ± 1.2)%、(9.2 ± 1.5)%和(9.0 ± 1.3)%,P ＜ 0.05)],其斑块内平滑肌细胞含量(11.8 ± 1.0)%明显高于其他3组[(7.8 ± 0.8)%、(7.5 ± 0.9)%和(7.3 ± 0.7)%,P ＜ 0.05)],另外3组间上述指标的差异无统计学意义(P ＞ 0.05).[结论] CTLA-4Ig融合蛋白能够阻抑高脂饮食饲养的ApoE-/- 小鼠动脉粥样硬化进程,其增加斑块内血管平滑肌细胞生成胶原作用有助增加AS斑块的稳定性.
