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原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究
本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造.在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化.利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞.结果表明细菌α-半乳糖苷酶佳诱导表达条件为:37℃、起始D(600)为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时.纯化后α-丰乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg.该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞.结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为B→O血型改造提供了更有效的工具酶.
关键词： 基因重组α-半乳糖苷酶 血型改造 B→O血型改造 -
重组α-半乳糖苷酶消除大豆低聚糖引起的小鼠肠胃胀气的研究
目的:分析食用大豆及其制品中的低聚糖引起肠胃胀气的原因.基因重组α-半乳糖苷酶对棉籽糖和水苏糖进行酶解,低聚糖对小鼠肠胃胀气的缓解情况.方法:以棉籽糖和水苏糖标准品作为受试物,分别灌胃给予不同周龄的昆明种小鼠,分析棉籽糖和水苏糖是否引起小鼠肠胃胀气;通过测量小鼠胀肠容积的方法检测胀气情况;硅胶薄层层析(TLC)检测低聚糖;SDS-PAGE法检测大豆蛋白.结果:棉籽糖、水苏糖均能够引起小鼠肠胃胀气;基因重组α-半乳糖苷酶可以消除小鼠食用棉籽糖和水苏糖后的肠胃胀气现象,添加的α-半乳糖苷酶对大豆蛋白没有影响.结论:α-半乳糖苷酶可做为食品添加剂,用来解决食用豆制品时发生的肠胃胀气.
关键词： 肠胃胀气 棉籽糖 水苏糖 基因重组α-半乳糖苷酶 -
B→O血型转换批量制备通用型红细胞的研究
目的建立B→O血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品.方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200 ml)的B型红细胞进行预处理.在专门设计的转型密闭处理系统中,用α-半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能.结果酶解前用pH 4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH 2.8缓冲液处理组;经α-半乳糖苷酶(100U/ml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3-DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围.结论建立了B→O血型转换通用型红细胞的批量制备工艺.通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格.
关键词： B→O血型转换 基因重组α-半乳糖苷酶 批量制备 通用型红细胞
