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山东省赫坎按蚊复合体成员种的分子鉴别研究
目的进一步确认山东省赫坎按蚊复合体成员种. 方法采用鉴别PCR方法,对采自山东省8个地点经形态学初步鉴定的645只蚊虫进行检测,并对已检测的标本随机抽取数个样本,进行rDNA-ITS2序列测定. 结果 645份样本中,中华按蚊占90.85%(586/645)、雷氏按蚊占5.27%(34/645),无扩增条带的标本占3.88%(25/645).测定已鉴别的山东省中华按蚊、雷氏按蚊的ITS2序列长度分别为469 bp和451 bp, 经Blast比对分析,显示与已公布的序列完全相同;3份无扩增条带标本的序列经核对为库蚊. 结论山东省分布的赫坎按蚊复合体成员种主要为中华按蚊、雷氏按蚊,其它成员种有待进一步证实.
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PCR-RFLP单酶切法鉴别赫坎按蚊复合体的研究
目的 建立一种新的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别技术,应用于现场按蚊样本的鉴别.方法 用分子生物学软件Vector NTI 9.0,对赫坎按蚊复合体的嗜人按蚊、雷氏按蚊、中华按蚊、八代按蚊4个近缘种按蚊rDNA基因的ITS2区段序列进行限制性内切酶酶切位点预测分析,选择特异性内切酶,建立一种能同时鉴别4种近缘种按蚊的聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)单酶切法鉴别技术,并对现场捕获的452只按蚊样本进行基因鉴别.结果 软件预测赫坎按蚊复合体近缘种4种按蚊的rDNA基因的ITS2区段可被限制性内切酶Dde Ⅰ切成大小易于区分的不同片段,PCR-RFLP单酶切实验结果和软件预测结果完全吻合.4个疟疾流行区捕获的452只按蚊样本经PCR-RFLP Dde Ⅰ单酶切法鉴定有20只嗜人按蚊、6只雷氏按蚊、391只中华按蚊、35只八代按蚊,与形态学鉴别结果符合率为93.4％,与PCR-RFLP双酶切法结果符合率为100％.结论 新建立的PCR-RFLP Dde I单酶切法基因鉴别技术可准确鉴别赫坎按蚊复合体,比传统的形态学鉴别更为简便、可靠,适合用于复合媒介地区的媒介监测.
