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境外输入性恶性疟原虫药物抗性基因多态性分析
目的 了解河南省输入性恶性疟原虫相关抗性基因的突变情况. 方法 采集河南省2016年自非洲劳务返乡的131例输入性恶性疟患者血样,提取DNA,采用Pfdhfr、Pfmdr1和K13基因序列引物进行巢式PCR扩增并测序,对测序结果进行序列比对,分析基因突变情况. 结果 131例输入性恶性疟患者自19个非洲国家务工返乡.131份血样均扩增出Pfdhfr、Pfmdr1和K13基因片段.其中Pfdhfr基因51,59和108位点氨基酸双突变NRNI型占2.29％,IC-NI型占10.69％,三突变IRNI型占85.49％,野生型占1.53％,未见四突变.Pfmdr1基因86突变率分别为9.16％,K13突变率为11.45％,共15份血样检测到9个位点突变. 结论 2016年河南省输入性恶性疟原虫Pfdhfr、Pfmdr1和K13基因均有不同程度的突变,其中Pfdhfr基因三突变型所占比例较高,K13基因未检测到与青蒿素抗性相关的突变.
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恶性疟原虫氯喹抗性的研究进展
恶性疟原虫氯喹抗药性的产生是一个多基因、多因素作用的复杂过程.该文通过对恶性疟原虫氯喹抗性产生机制以及与抗性相关的pfmdr1基因、pfcrt基因和cg2基因等的研究进展进行综述.探讨氯喹抗性产生的机制,为恶性疟原虫氯喹抗性机制的研究及新药设计提供参考.
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中缅边境恶性疟原虫pfmdr1基因多态性及pfmsp1等位基因分型研究
目的 分析中缅边境恶性疟原虫多抗药基因1(riamoaium Jaicipparum mumarug resustance1,pfmdr1)基因编码蛋白86位点多态性及裂殖子表面蛋白1(P.falciparum merozoite surface protein 1 gene,pfmsp1)等位基因的分型特征.方法 采用chelex-100法提取DNA,PCR扩增pfmdr1基因编码蛋白86位点及pfmsp1基因第2区与第3区部分片段,并对其进行DNA测序,对扩增片段基因的结构、同源性进行分析.结果 检测的50份血样中,49份成功扩增pfmdr1基因,49份在第25位氨基酸均发生缺失,且在第27～29位氨基酸由STA都突变为EYR,9份在第35位氨基酸缺失,第86位氨基酸均未发生点突变.50份恶性疟患者样本中有49份共扩增出72个pfmsp1基因片段,以MAD20型为主导型占93.88％,K1、RO33型为次之,并存在不同基因株混合感染现象.结论 中缅边境恶性疟原虫株pfmdr1基因第86位氨基酸点无突变,pfmsp1存在MAD20型、K1型和RO33型3种等位基因型,以MAD20型为优势虫株.
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恶性疟原虫海南分离株pfmdr1基因与氯喹抗性的相关性分析
目的 了解海南省恶性疟原虫pfmdr1基因同氯喹抗性的关系.方法 采用套式PCR技术特异性扩增pfmdr1基因含有编码第86位、1042位和1246位氨基酸的基因片段,并对扩增产物进行RFLP分析.结果 42个样本中,pfmdr1第86位氨基酸均未发生突变,即86位氨基酸是野生型的Asn,而不是突变型的Tyr.第1246位氨基酸发生突变的样本共有7个,全部为抗性虫株.第1042位点PCR扩增结果阳性的37个样本中突变的样本共有10个,其中9个为抗性虫株,一个为敏感虫株.结论 我国海南省恶性疟原虫氯喹抗性产生与pfmdr1 86位氨基酸基因多态性无关,但第1042和1246位氨基酸的突变更易在抗性虫株中检出.
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输入性恶性疟原虫耐药相关基因Pfcrt和Pfmdr1单倍型及突变分析
目的 了解目前山东省输入性恶性疟原虫抗药性基因Pfcrt和Pfmdr1的单倍型,分析突变基因型及其分布情况.方法 根据恶性疟原虫Pfcrt和Pfmdr1基因序列设计套式PCR引物,对采自全省非洲务工返乡的输入性恶性疟感染者血样扩增,并对其产物进行基因测序和序列对比分析.结果 68例样本P fcrt基因第72～76位点和Pfmdr1基因第86、1 042和1 246位点目的片段全部成功扩增和测序.P fcrt基因中69.12％为野生单倍型CVMNK,30.88％为突变单倍型,突变型包括CVIET、CVIDT及混合型,其中CVIET数量多.Pfmdr1基因中69.12％为野生单倍型NND,30.88％为突变单倍型,即YND及混合基因型.6个非洲输入来源国样本中,除几内亚Pfcrt基因全部为野生型外,其它国家Pfcrt和Pfm-dr1基因均有突变型存在.5例样本Pfcrt和Pfmdr1基因共同表现为突变单倍型.结论 山东省输入性恶性疟Pfcrt和P fmdr1基因突变单倍型具有多样化特征.Pfcrt和Pfmdr1突变型比例均低于野生型,提示目前该省流行的输入性恶性疟未出现严重的氯喹耐药性.
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海南省恶性疟原虫氯喹抗性相关基因 Pfmdr1多态性分析
目的了解海南省恶性疟原虫 Pfmdr1基因中的关键性点突变是否与海南株恶性疟原虫产生氯喹抗性有关.方法采用套式 PCR法分别扩增 Pfmdr1基因中含有第 86位和 1246位氨基酸的多态性片段,并对扩增产物进行限制性内切酶酶切分析,观察是否存在突变位点. 结果 45个样本中, Pfmdr1基因第 86位氨基酸均未发生点突变,即 86位密码子是 Asn而非突变型的 Tyr; Pfmdr1基因发生 D1246Y突变的样本有 3个,其中 1个是抗性株, 2个为敏感株.结论我国海南株恶性疟原虫产生氯喹抗性与 Pfmdr1基因的多态性无显著关系.
