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NcSAG4基因文献资料
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新孢子虫NcSAG4基因克隆及原核表达
目的 构建新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21 (DE3)中表达.方法 根据新孢子虫NcSAG4基因序列设计特异性引物,以新孢子虫总核酸为模板PCR扩增目的片段,与pMD-18-T连接,构建克隆载体pMD-NcSAG4,经双酶切后回收目的片段,与表达载体pGEX-T连接,构建原核表达载体pGEX-NcSAG4,用IPTG诱导,通过SDS-PAGE及Western blot进行鉴定.结果 成功构建了新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体pGEX-Nc-SAG4；SDS-PAGE电泳显示,在IPTG诱导下阳性菌高效表达了分子质量单位为18.79 ku的蛋白质；Western blot显示表达产物可被抗新孢子虫的多克隆血清识别.结论 成功构建了NcSAG4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,为建立经济、实用的诊断新孢子虫病的ELISA方法奠定了基础.
