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球形芽胞杆菌文献资料
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球形芽胞杆菌S层蛋白基因的克隆及原核表达
目的 克隆球形芽胞杆菌S层蛋白的编码基因,实现其原核表达并纯化表达产物. 方法 提取球形芽胞杆菌菌体基因组DNA,根据GenBank公布的核酸序列设计并合成引物,扩增S层蛋白编码基因sllB,与pMD19-T载体连接；测序验证后,构建原核表达质粒pET28 a (+)-sllB并转化BL21( DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAG和Western blot鉴定表达产物,亲和柱层析纯化重组蛋白. 结果 扩增获得S层蛋白编码基因sllB全长(3 306 bp),与参考序列同源性为97.5％.构建的原核表达质粒pET28 a (+)-sllB转化BL21( DE3)后,SDS-PAGE显示表达蛋白的分子质量为116 ku,与理论值相符.Western blot显示其全蛋白、可溶性蛋白和不溶性蛋白中均被鼠抗Penta-His抗体识别.结论 获得了球形芽胞杆菌S层蛋白编码基因sllB,并实现了其原核表达.
