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显色芯片法文献资料
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16SrDNA结合显色法芯片技术鉴定分枝杆菌的方法学研究
目的 建立16SrDNA结合显色法芯片技术(玻璃芯片转尼龙膜显色法)鉴定分枝杆菌的方法. 方法 利用GenBank中细菌16SrDNA保守区序列,设计两对分枝杆菌属特异性通用引物,采用双重PCR法同时扩增16SrDNA的2个不同片段;根据已知16种分枝杆菌的16SrDNA序列,设计合成对应的特异性寡核苷酸探针.先用通用引物PCR扩增所有标准菌株DNA,PCR产物分别与16种分枝杆菌探针的玻璃芯片杂交,通过尼龙膜显色进行分析. 结果 应用显色法芯片技术分析16种分枝杆菌标准菌株和5种非分枝杆菌菌株,对其双重PCR、杂交、洗涤条件进行优化.确定双重PCR佳退火温度为52 ℃,在该温度下除5株非分枝杆菌外均产生2条DNA片段,大小分别为272～280 bp和183～192 bp;杂交温度32 ℃、2×SSC洗涤5min、0.2×SSC洗涤1 min,16种分枝杆菌的杂交效果好,特异性达100%. 结论 用显色芯片法检测16SrDNA,可准确鉴别16种分枝杆菌.
