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组蛋白乙酰化/脱乙酰化与DNA甲基化的关系
组蛋白乙酰化和脱乙酰化与DNA甲基化有密切的关系.本文介绍了DNA甲基化对组蛋白乙酰化/脱乙酰化影响,组蛋白乙酰化/脱乙酰化对DNA甲基化的影响,以及组蛋白乙酰化/脱乙酰化和DNA甲基化协同效应.
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亚硝胺诱导食管癌变早期基因差异表达与表观遗传修饰的关系
目的:通过基因芯片技术检测亚硝胺诱导食管癌变过程中,食管组织基因表达的差异,分析不同阶段基因表达的特点以及基因差异表达与DNA甲基化的相关性.方法:小鼠随机分为2组,A组(对照组)40只,灌喂蒸馏水;B组(实验组)70只,灌喂诱导混合物(20 g/L亚硝酸钠+200 g/L N,N-二甲基苄胺).在诱导时间4、8、20 wk时,提取食管组织RNA,反转录合成cDNA,并与芯片杂交,对芯片结果进行分析,比较诱导进程中不同组别的表达差异.结果:亚硝胺诱导早期病变进程中原癌基因表达的变化呈现整体逐步上升的趋势,且阶段表达特性显著,但多数抑癌基因未表现出明显变化.甲基化酶基因在4 wk无明显改变,但在8、20 wk稍有升高,去甲基化酶基因中Mbd2b从8 wk开始上调,但Gadd45a从4 wk就已诱导上调,8、20 wk依然明显上调.未发现明显改变的组蛋白乙酰化酶基因.结论:在亚硝胺诱导食管癌变过程中,大量基因的上调表达可能与早期基因组的低甲基化密切相关,Gadd45a可能参与了诱导早期的脱甲基作用.
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表基因修饰参与H2O2介导人晶状体上皮细胞SRA01/04的生长停滞
目的 探讨在H2O2介导人晶状体上皮细胞SRA01/04生长停滞下,表基因修饰的改变.方法 将培养的人晶状体上皮细胞SRA01/04分为3组,分别为:A组:先加H2O2 组,即在细胞培养液内先加0.5 μmol·L-1 H2O2,30 min后再加吡诺克辛液300uL培养23.5 h;B组:后加H2O2组,印先在细胞培养液内加吡诺克辛钠液300μL培养23.5 h后,再加0.5μmol·L-1 H2O2培养30 min；C组:对照组,即不加H2O2及药物培养24h.对各组细胞进行免疫细胞化学检测和Western bolt检测,分析各组细胞内组蛋白脱乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)1、核因子-κB(nuclear factor-Kappa B,NF-κB)、c-myc及周期蛋白1(Cyclin D1)的表达.结果 免疫细胞化学检测结果显示,NF-κB表达信号的灰度值:A组(192.25±5.56)＞B组(170.40±2.50) ＞C组(157.14±1.09),3组间两两相比差异均有统计学意义(均为P ＜0.01)；HDAC1、c-myc及Cyclin D1表达信号的灰度值均为C组＞B组＞A组,且3组间两两相比差异均有统计学意义(均为P＜0.01).Western blot检测结果显示,相较于对照组,以H2O2处理人晶状体上皮细胞SRA01/04后HDAC1、Cyclin表达减弱,并且A组比B组更为明显；同时可见NF-κB的表达增强,A组也比B组更为明显.结论 在H2O2介导人晶状体上皮细胞SRA01/04生长停滞下,HDAC1活性减弱,NF-κB激活,c-myc及Cyclin D1的表达下调.
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HDAC2 cDNA的克隆及在酵母细胞中的表达
目的:本研究的目的为获得HDAC2的cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因.方法:利用RT-PCR方法,从人HeLa细胞中扩增出一约1.5Kb的DNA片段,全自动测序后,重组入pLexA载体,构建成pLexA-HDAC2,用醋酸锂法转化酵母菌EGY48(p8op-lacZ).结果:结果显示,获得的1.5Kb的DNA片段碱基序列与文献报道的HDAC2的cDNA一致.pLexA-HDAC2转化EGY48(p80p-LacZ)3天后,长出1mm大小的白色菌落.结论:上述结果表明pLexA-HDAC2可在EGY48(p8op-LacZ)稳定表达,无毒性,也没有自身激活LacZ的功能,可作为酵母双杂交系统中的靶基因.
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3个HDAC1的保守氨基酸定点突变的获得
目的:为了研究HDAC1保守氨基酸的定点突变对其功能的影响,需要建立HDAC1保守氨基酸定点突变的突变子.方法:在克隆HDAC1 cDNA的基础上,利用Altered SiteⅡ体外突变系统对HDAC1保守氨基酸中的三个氨基酸位点进行突变,经DNA测序鉴定.结果与结论:结果分别获得了HIDAC1的C151A,Y188F,S197A的定点突变子,为进一步研究HDAC1保守氨基酸的定点突变对其功能的影响打下了基础.
