首页 > 文献资料
-
转化生长因子-β1联合内脏内胚层样END-2细胞共培养对小鼠胚胎干细胞体外分化为心肌细胞的实验研究
目的 添加转化生长因子-β1(TGF-β1)以及与内脏内胚层样END-2细胞共培养,定向诱导胚胎干细胞(ESCs)分化,探索联合使用化学诱导法与共培养法对ESCs的心肌细胞定向诱导分化作用.方法 将ESCs悬浮培养形成2～3 d类胚体(EBs),再向培养液内添加TGF-β1,或(和)将2～3 d EBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养.自然分化为对照组.免疫荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白(α-actin)及肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构.结果 向培养液添加TGF-β1或将2～3 d EBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养,各自有(43±2.08)%(P＜0.01),(69±3.61)%(P＜0.01),(65±3.06)%(P＜0.01)的EBs出现自发节律性收缩,均表达心肌细胞特异性蛋白α-Actin和TnT,观察到心肌样超微结构.自然分化组发生自发节律性收缩的EBs只有(12±1.53)%,尤其是联合使用两种诱导方法,自发性收缩的EBs高达(91±1.52)%(P＜0.01),收缩区域较单一诱导组大,且细胞形态较单一.结论 联合使用化学诱导和共培养2种诱导法对ESCs的心肌细胞定向分化有协同作用.
-
体外诱导鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的实验研究
目的:探讨小鼠胚胎干细胞(ESCs)在转化生长因子-β1(TGF-β1)联合内脏内胚层END-2细胞共培养诱导条件下分化为心肌细胞的特征.方法:小鼠胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上增殖培养,先将ESCs悬浮培养形成2-3 d的拟胚体(EBs ),再将2-3 d EBs种植到含有TGF-β1的24孔板中进行诱导,以及种植到铺有END-2细胞饲养层的24孔板中进行诱导,培养液中同时加入TGF-β1. 免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白(α-Actin)及肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构.流式细胞仪检测EBs集落心肌细胞的平均分化率.结果:TGF-β1诱导组和TGF-β1联合内脏内胚层END-2细胞共培养诱导组分别有43%,91%(P＜0.05)的拟胚体出现自发节律性收缩,均表达心肌细胞特异性蛋白α-Actin和TnT,以及观察到心肌样超微结构,但在共培养的条件下,自发节律性收缩区域较大,且细胞形态较单一.两诱导组EBs集落心肌细胞平均分化率分别是35%,74%(P＜0.05).结论:TGF-β1联合内脏内胚层END-2细胞共培养对小鼠ESCs向心肌细胞定向分化有协同作用,具有较高的诱导分化率.
-
内脏内胚层样END-2细胞体外诱导鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究
目的 探讨内脏内胚层样END-2细胞体外诱导胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)分化为心肌细胞的特征.方法 用鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonicfibroblasts,MEF)作为饲养层促进ESCs增殖并抑制其分化,先将ESCs悬浮培养形成2～3 d的拟胚体(embryoid bodies,EBs),再和END-2细胞共培养诱导向心肌细胞分化.实验分4组.第1,2组EBs分别和END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养;第3组EBs和表面铺有一层琼脂糖的END-2细胞共培养;第4组自然分化组为对照组.相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)的表达;透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构.结果 各实验组均可见自发节律性收缩的拟胚体.随着培养的延长,自发节律性收缩的拟胚体数目也增加,均表达心肌细胞特异性蛋白TnT,以及观察到心肌样超微结构.在和END-2细胞直接接触的诱导条件下,分化的细胞形态较单一.结论 END-2细胞通过分泌可溶性细胞因子可诱导ESCs向心肌细胞分化,直接接触在END-2细胞诱导作用中并不是必要的,但可诱导出较单一的细胞.
