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鸡胚脊髓活体电转文献资料
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鸡胚发育过程中音猬因子超表达对Pax家族基因表达的影响
目的 探讨鸡胚发育过程中,音猬因子(Shh)基因在脊髓中超表达后对配对框(Pax)基因家族Pax3、Pax6以及Pax7蛋白表达的影响.方法 在鸡胚龄2.5 ～3.0d(E2.5 ～ E3)时,实验组利用鸡胚脊髓活体电转基因技术将携带Shh基因的质粒和携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒共转入鸡胚脊髓,对照组则只转入报告基因质粒.E4时取材,每组至少取3例,冷冻切片后采用原位杂交技术检测Shh基因的mRNA表达水平,利用荧光免疫技术检测Shh在鸡胚脊髓中超表达后对Pax3,Pax6以及Pax7蛋白表达水平的影响,并将对照组及实验组中3种基因在脊髓两侧的表达量进行统计学分析.结果 原位杂交结果表明,E4时Shh的mRNA主要表达在脊髓底板和脊索,实验组结果显示,利用鸡胚脊髓活体电转技术成功建立了Shh超表达模型.对照组中荧光免疫结果表明,Pax3主要表达于脊髓翼板、生肌节、背根以及背根神经节;Pax6主要表达于跨越翼板和基板的脊髓中间部位;Pax7则主要均匀表达于翼板、顶板和生肌节.Shh超表达后,脊髓转染侧与未转染侧相比Pax3、Pax6以及Pax7的表达量差异极显著(P＜0.01),这3种基因在脊髓中的表达均被抑制.结论 在鸡胚发育过程中,Pax家族Pax3、Pax6以及Pax7 3种基因在鸡胚脊髓中具有不同的表达模式,Shh超表达后对其均具有明显的抑制作用,显示这3种Pax基因受Shh信号通路调控.
