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发动蛋白-1的脯氨酸和精氨酸富集域功能域与大鼠神经突触小体相互作用蛋白的筛选及鉴定
目的 筛选及鉴定发动蛋白-1(Dynamin-1)的脯氨酸和精氨酸富集域(PRD)功能域在大鼠神经突触小体中的相互作用蛋白.方法 构建Dynamin-1 PRD功能域的重组原核表达质粒pGEX-4T-2-PRD,通过大肠杆菌表达系统进行诱导表达；谷胱甘肽琼脂糖凝脂柱纯化得到融合蛋白GST-PRD,继而利用谷胱甘肽巯基转移酶沉淀技术,筛选出GST-PRD融合蛋白与分离提取的大鼠神经突触小体的相互作用蛋白,并通过液相质谱技术结合数据库,对上述获得的相互作用蛋白进行分析、鉴定.结果 通过构建pGEX-4T-2-PRD重组质粒及诱导表达,成功纯化出了融合蛋白GST-PRD；同时成功提取了大鼠神经突触小体,经谷胱甘肽巯基转移酶沉淀技术联合液相质谱分析,获得在大鼠神经突触小体中与Dynamin-1的PRD域有相互作用的蛋白共35个,分别属于突触囊泡相关蛋白、细胞骨架蛋白、代谢酶及其他类的蛋白.结论 本研究获得的与Dynamin-1的PRD域有相互作用的蛋白共35个.
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促红细胞生成素对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1表达影响
目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1(Drp-1)表达的影响.方法 81只SD大鼠,分为假手术组、对照组和EPO组,每组各27只.EPO组、对照组采用单侧输尿管结扎并剪断建立肾间质纤维化模型,假手术组仅游离输尿管而不结扎和剪断;EPO组予EPO皮下注射;假手术组和对照组给予等量生理盐水皮下注射.各组于术后7、14和21 d取动脉血分离血清检测血肌酐和尿素氮水平.取梗阻侧肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,观察肾脏病理学变化.用免疫组化方法检测肾组织Drp-1的表达.结果 ①EPO组各时点血清肌酐和尿素氮水平显著低于对照组(P<0.01),但高于假手术组(P<0.05).②EPO组各时点肾组织病理改变较对照组明显减轻,肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积均低于对照组(P均<0.05),但高于假手术组(P<0.05).③EPO组肾组织的Drp-1表达显著低于对照组(P<0.05),但高于假手术组(P<0.05).结论 Drp-1在大鼠肾间质纤维化肾组织中表达增加,参与肾脏纤维化过程;EPO可以通过抑制Drp-1表达,从而延缓肾间质纤维化的进展.
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双环醇对肾间质纤维化大鼠肾组织Drp-1表达的影响
目的 探讨双环醇对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中发动蛋白-1(Drp-1)表达的影响及对肾脏的保护作用.方法 81只SD大鼠,采用UUO致单侧肾间质纤维化模型,随机分假手术组、模型组、治疗组各27只.治疗组予双环醇灌胃治疗;假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃.于术后7、14、21 d取动脉血分离血清测定肌酐和尿素氮水平,观察肾功能变化;取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色,观察肾脏病理学变化;采用免疫组化方法检测肾组织Drp-1表达.结果 治疗组血清肌酐和尿素氮水平明显低于模型组(P＜0.01);肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积及肾组织Drp-1蛋白表达均显著低于模型组(P均＜0.05).结论 Drp-1参与了大鼠肾间质纤维化的病理过程;双环醇可通过抑制Drp-1而延缓肾间质纤维化的进展.
