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胰甘油三酯脂酶在大鼠两型星形胶质细胞中的表达
目的 比较胰甘油三酯脂酶在1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A)中的表达情况.方法取新生大鼠脑皮质,体外分离培养纯化的T1A和T2A,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR))技术检测胰甘油三酯脂酶mRNA在两型星形胶质细胞中的表达差异,并且通过激光共焦免疫荧光双标技术从蛋白水平进一步证实. 结果胰甘油三酯脂酶在T1A中不表达或低表达,主要定位于细胞核中;而在T2A中表达水平较高,分布广泛,在胞浆、胞核及细胞突起中均有表达. 结论胰甘油三酯脂酶在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,胰甘油三酯脂酶在T2A中高表达,提示T2A在中枢神经系统脂代谢方面起重要的作用.
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新生大鼠大脑皮质O-2A祖细胞的体外诱导分化
目的在获取高纯度O-2A祖细胞的基础上,探讨O-2A祖细胞在体外分化的形态学特点.方法采用"两次恒温摇床振荡法"和差速贴壁法,结合使用神经营养因子(bFGF、PDGF-AA),进行O-2A祖细胞体外纯化和扩增培养,并观察O-2A祖细胞在有血清和无血清培养条件下的分化情况,用免疫细胞化学鉴定分化成熟的2型星型胶质细胞和少突胶质细胞.结果培养的O-2A祖细胞能形成克隆球,具有增殖能力,经免疫细胞化学鉴定细胞纯度达90%以上.在含血清的培养基中能定向分化为2型星形胶质细胞,其胞体较大,从胞体上伸出细长突起,由突起上再发出更为细小的分支,GFAP和A2B5抗体标记均为阳性;在无血清的化学条件培养基中能定向分化为少突胶质细胞,其胞体较小,突起短而细,相互交织呈"蜘蛛网"样,CNPase抗体标记阳性.结论(1)培养的O-2A祖细胞保持定向干细胞的特性,具有增殖和双向分化的潜能;(2)O-2A祖细胞定向分化为2型星形胶质细胞过程中经历较长的增殖期,而分化为少突胶质细胞过程中则增殖期较短;(3)分化的2型星形胶质细胞和少突胶质细胞在形态学和抗原表达上存在差异.
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桩蛋白在两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达
目的:观察桩蛋白在大鼠两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达情况.方法:通过细胞培养并结合免疫荧光和RT-PCR方法,观察了桩蛋白的mRNA及蛋白在大鼠两型星形胶质细胞T1A和T2A以及神经元中的表达.结果:RT-PCR显示体外培养的T1A表达桩蛋白mRNA,而T2A和神经元未表达桩蛋白mRNA；免疫荧光染色显示桩蛋白主要分布于T1A的胞浆及突起中.结论:桩蛋白在T1A中表达,但未表达于T2A和神经元中；本实验结果为进一步研究桩蛋白在T1A中的生物学作用奠定了基础.
