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Desert Hedgehog基因文献资料
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大鼠Desert Hedgehog基因的克隆和表达
目的 克隆大鼠Desert Hedgehog(DHH)基因,构建其真核表达载体并转染PT67细胞;同时制备DHHcRNA正义及反义探针用于检测其在细胞中的表达.方法 提取SD大鼠睾丸总RNA,RT-PCR法扩增DHH-cDNA片段,连接于pGEM-T Easy载体,经测序后构建真核表达载体pLXSN/DHH并转染PT67细胞;重组质粒经限制性内切酶Not Ⅰ和Nco Ⅰ酶切、回收后,进行转录标记反应,原位杂交检测DHH在PT67细胞中的表达.结果 RT-PCR扩增得到1220 bp的片段;成功构建了真核表达载体pLXSN/DHH;制备DHH正义及反义探针浓度分别为150mg/L和80mg/L;DHH在PT67细胞中有表达.结论 克隆的DHH基因与大鼠Sertoli细胞的DHH基因相同,成功标记了特异、敏感的DHHcRNA探针,转染的DHH基因能够在PT67细胞中表达.
关键词： Desert Hedgehog基因 克隆 表达 逆转录聚合酶链反应 大鼠
