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沉默TROP2基因抑制胃癌BGC-823细胞体外迁移侵袭能力
目的 探讨TROP2基因在胃癌细胞迁移侵袭过程中的作用.方法 用基因克隆技术构建针对TROP2的小干扰RNA(siRNA),瞬时转染胃癌BGC-823细胞系,荧光实时定量PCR和Western blot法检测细胞TROP2 mRNA和蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移侵袭能力.结果 酶切鉴定和DNA测序分析显示,TROP2靶向RNA干扰重组质粒构建成功.筛选得到佳十扰效果质粒,该质粒转染细胞后,细胞增殖和迁移侵袭能力显著下降(P<0.05).结论 干扰TROP2基因具有抑制胃癌BGC-823细胞迁移侵袭的作用,TROP2基因可能成为癌基因靶向治疗的分子靶点.
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靶向抑制TROP2基因表达对胰腺癌细胞生物学特性的影响研究
目的 探讨抑制胰腺癌组织中肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 选取胰腺癌组织和相应的癌旁组织各46例.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并分析胰腺癌组织和癌旁组织中TROP2基因的mRNA表达情况;将人胰腺癌PANC-1细胞分为对照组、NC-siR-NA组和TROP2-siRNA组,培养48 h后,采用蛋白质印迹法检测并分析TROP2、cleaved caspase 3、NOTCH1和HES1蛋白表达情况;采用CCK8法和流式细胞仪分别检测并分析细胞的增殖和凋亡情况.结果 在胰腺癌组织中TROP2基因的mRNA表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01).对照组、NC-siRNA组和TROP2-siRNA组中,TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达比较,差异均有明显统计学意义(P﹤0.01);TROP2-siRNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率及NOTCH1、HES1蛋白表达均明显低于对照组,细胞凋亡率和cleaved caspase 3蛋白表达均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01),而NC-siRNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).结论 抑制胰腺癌组织中TROP2基因表达,可以明显降低肿瘤细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其机制与阻断NOTCH1信号通路有关.
关键词： TROP2基因 胰腺癌 Notch1信号通路 -
人滋养层细胞表面抗原2基因表达对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究
目的 探讨抑制中人滋养层细胞表面抗原2 (human trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)基因表达对舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)细胞增殖、凋亡的影响及机制,以期为预防和治疗TSCC提供依据.方法 选取2014年2月至2016年5月于郑州大学第一附属医院口腔颌面外科行TSCC根治手术的患者46例,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测TSCC组织及相应癌旁组织中Trop2 mRNA及蛋白表达.分别用阴性对照小干扰RNA(阴性对照小干扰RNA组)、Trop2小干扰RNA (Trop2小干扰RNA组)转染CAL-27细胞,另设空白对照组,转染48 h后行蛋白质印迹法检测Trop2、Ki-67增殖指数、细胞周期蛋白D1、裂解胱天蛋白酶3、Notch1蛋白和Hes1蛋白表达,细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率.结果 TSCC中Trop2基因mRNA (5.72±1.13)及蛋白(0.77±0.06)表达均显著高于癌旁组织(分别为0.92±0.15、0.11±0.01)(P＜0.05);转染Trop2小干扰RNA后CAL-27细胞中Trop2的蛋白表达(0.08±0.01)显著低于空白对照组(0.46±0.05),Trop2小干扰RNA组细胞存活率[(64.28±4.12)％]、S期细胞[(14.54±1.02)％]、Ki-67蛋白(0.12±0.01)、细胞周期蛋白D1 (0.04±0.01)表达均显著低于空白对照组[分别为(100.00±1.02)％、(27.33士1.11)％、0.24±0.02及0.20±0.02]和阴性空白对照小干扰RNA组[分别为(96.55±2.43)％、(26.67±1.23)％、0.26±0.03及0.21±0.02],细胞凋亡率(23.55±1.45)％、G0/G1期细胞[(72.32±0.94)％]及裂解胱天蛋白酶3(0.16±0.02)、Notch1蛋白(0.62±0.06)、Hes1蛋白(0.50±0.05)表达均显著高于空白对照组和阴性对照小干扰RNA组(P均＜0.05).结论 抑制TSCC细胞中Trop2基因表达可降低癌细胞增殖,阻滞细胞于G1期并促进细胞凋亡,与上调Notch1信号通路相关.
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靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究
目的 探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基凶的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制.方法 以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况.结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P＜0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P＜0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P＜0.01).结论 RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路.
关键词： 胃癌 TROP2基因 增殖 凋亡 Wnt/β-catenin信号通路
