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阿米洛利对PC12细胞的保护作用及其对LAMP2a表达影响
目的 研究阿米洛利对PC12细胞的保护作用,及其对LAMP2a表达水平的影响.方法 pH 6.0的酸性培养液诱导PC12细胞损伤,同时给予阿米洛利进行干预,四甲基偶氮唑盐(MTT)、乳酸脱氢酶(LDH)和流式细胞技术检测细胞存活率、损伤程度及凋亡率,Western blot检测LAMP2a表达水平.结果酸性培养液处理24h,细胞存活率降低至(67.2±5.1)%,上清液中的LDH增多至(407.9±11.1 )U/L,凋亡率升高至(27.8±2.6)%.阿米洛利(100 μmol/L)提高PC12细胞的存活率至(84.9±2.2)%,LDH降低至(314.1±5.2)U/L,细胞凋亡率降低至(17.8±1.3)%,与pH6.0组相比(P＜0.001).酸处理导致LAMP2a表达升高,而阿米洛利能够显著抑制LAMP2a的表达(P＜0.05).结论 阿米洛利通过下调LAMP2a的表达发挥神经保护作用.
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电针对帕金森病模型大鼠脑黑质内Lamp2a、Hsc70、α-syn表达的影响
目的:观察电针对鱼藤酮诱导的帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠脑黑质内Lamp2a、Hsc70、α-syn表达的影响,探讨电针治疗帕金森病的可能作用机制.方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针治疗组,每组15只.采取颈背部皮下注射鱼藤酮法制备帕金森病模型,假手术组只注射不合鱼藤酮的等量葵花油乳化液.正常组、假手术组、模型组不进行任何治疗;电针治疗组在造模完成后取穴“风府”、“太冲”,连续波,频率120次/min,每次治疗20 min,每天1次,疗程为28 d.免疫组化法检测模型大鼠黑质内TH、α-syn的阳性表达,并用Western blot法检测模型大鼠黑质内Lamp2a、Hse70、α-syn的表达.结果:模型组大鼠表现出明显的PD症候群特征,电针干预后模型大鼠行为学评分明显降低(P＜0.01);免疫组化法及West-ernblot检测显示电针治疗通过上调Lamp2A、Hsc70水平能抑制错误折叠蛋白α-syn的表达,提高TH的阳性表达.结论:电针可以抑制具有细胞毒性作用的α-syn的集聚,保护多巴胺能神经元,抑制帕金森病的发展,其机制可能与干预分子伴侣介导的自噬有关.
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Lamp2a参与Plin5在肝脏脂质分解中的作用
目的:探讨肝脏中lamp2a对plin5表达及其功能的影响.方法:利用Western blot及免疫组化检测正常人和脂肪肝患者肝脏中lamp2a与plin5表达相关性.利用HepG2细胞构建lamp2a敲减的细胞系HepG2-L2A,通过给予油酸刺激、溶酶体抑制剂处理等进一步在细胞水平证实其相关性.结果:Western-Blot及免疫组化检测显示脂肪肝患者肝组织中lamp2a的表达明显下降,而plin5表达显著升高.Western-Blot试验提示正常培养的HepG2-L2A细胞中plin5表达较HepG2细胞中升高,Bodipy染色提示HepG2-L2A细胞中脂滴数量也明显增加(124± 15.3 vs 273± 19.1).在分解试验中,HepG2细胞中plin5明显降低,脂滴数量也明显减少(282± 24.1 vs 192± 17.5);而HepG2-L2A细胞中plin5仍然处于高水平,脂滴数量仍然较多(325± 24.0 vs 286土28.7).当给予溶酶体抑制剂处理时,HepG2细胞中plin5降解明显抑制,而HepG2-L2A中plin5水平未见明显改变.结论:肝脏中lamp2a的异常表达影响plin5的表达,进而影响了脂质的分解.
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槲皮素对慢性酒精暴露小鼠肝脏自噬的调控
目的 探讨慢性酒精暴露对肝脏溶酶体自噬的影响及槲皮素的拮抗效应.方法 成年♂C57 BL/6 J小鼠按体质量随机分为4组,即正常对照组(Con)、酒精组(Eth)、酒精+槲皮素组(Eth+Qu)、槲皮素对照组(Qu).各组小鼠等能量配对喂养15周,检测肝脏损伤相关指标、溶酶体损伤及自噬标志蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,长期酒精摄入引起肝脏严重的脂质沉积、氧化损伤(MDA水平明显升高,而GSH水平明显降低)、血清ALT、AST水平明显增加;肝细胞中自噬体标志蛋白LC3-II及自噬底物蛋白p62异常升高;Lyso-Tracker Red染色后,酒精组肝脏荧光强度明显减弱,胞质中cathepsin B活性明显升高;此外,自噬体与溶酶体融合关键蛋白溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)的表达也明显下降;槲皮素干预减轻了溶酶体损伤、改善了自噬体的积累,降低了LC3-II与p62的蓄积,促进了自噬体与溶酶体的融合,同时上调LAMP2A的表达,肝脏损伤明显缓解.结论槲皮素可能通过减轻溶酶体损伤、上调自噬体与溶酶体融合关键蛋白LAMP2 A水平,缓解慢性酒精暴露所致肝脏自噬抑制,从而减轻酒精性肝损伤.
