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Y-27632对小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响
目的：观察ROCK抑制剂Y－27632对体外缺血清培养的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代分离培养小鼠骨髓单个核细胞，应用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测。成骨、成脂肪、成软骨分化后分别进行茜素红、油红O及甲苯胺蓝染色。将第3代细胞随机分为3组：对照组、模型组（无血清）、Y－27632组（无血清＋10μmol／L Y－27632），分别于培养后24、48、72 h收集细胞进行流式细胞仪TUNEL法观察各组细胞凋亡率，培养后24 h Western blot法检测ROCK1及cleaved caspase 3表达。结果分离的骨髓单个核细胞CD29（＋）、CD44（＋）、CD90（＋）、CD34（－），三系分化后茜素红染色（＋），油红O染色（＋），甲苯胺蓝染色（＋）。 Y－27632能明显降低由于缺血清培养导致的BMSCs的凋亡率（P＜0.01），Y－27632能够明显降低ROCK及cleaved－caspase 3表达（ P＜0.01）。结论分离的骨髓单个核细胞就是骨髓间充质干细胞。Y－27632能够抑制由于缺血清培养导致的小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡。
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RhoA/Rho激酶及其抑制剂对COPD大鼠气道重塑的影响
目的 观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺组织RhoA,ROCKⅡ含量的变化,探讨Y-27632对COPD大鼠RhoA/Rho激酶(ROCK)信号通路的调控及其对气道重塑的影响.方法 将60只清洁级Wister 雄性大鼠按随机数字表法分成3组,即正常对照组、COPD模型组和Y-27632干预组,每组20只,采用烟熏及气管滴入脂多糖(LPS)法建立COPD大鼠模型,用ROCK特异性抑制剂Y-27632进行干预,测定大鼠的肺功能,光镜观察肺组织结构,用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(Wat/Pbm)和气道平滑肌厚度(Wam/Pbm),反映气道重塑的程度.免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白的表达,RT-PCR法测定RhoA、ROCKⅡmRNA含量.结果 ①与对照组比较,模型组吸气阻力(Ri)和呼气阻力(Re)升高,0.3秒用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV0.3/FVC)降低(P＜0.01);干预组肺功能改善,与模型组比较有差异(P＜0.01).②模型组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达增高,Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达.③模型组Wat/Pbm、Wam/Pbm分别为(92.68 ±4.32)、(38.43±3.53) μm2/μm,对照组分别为(33.15 ±4.02)、(14.33±1.23) μm2/μm,模型组支气管壁、平滑肌层厚度增加(P＜0.01);干预组Wat/Pbm、Wam/Pbm分别为(61.12 ±2.92)、(25.57 ±2.69) μm2/μm,均低于模型组大鼠(P＜0.01).结论 Y-27632通过抑制RhoA/ROCK信号通路,能够下调RhoA,ROCKⅡ的表达,抑制COPD大鼠Wat/Pbm和Wam/Pbm.
关键词： RhoA/ROCK信号通路 慢性阻塞性肺疾病 气道重塑 Y-27632 -
ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对人Tenon囊成纤维细胞增殖、凋亡和黏附性的影响
目的 观察ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(ocular Tenon capsule fibroblasts,OTFs)增殖、凋亡和黏附性的影响.方法 体外培养的第4～6代OTFs经溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导后,不同浓度Y-27632处理,采用MTT测定细胞增殖抑制率和细胞黏附抑制率,未经LPA诱导OTFs细胞同时采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术测定细胞凋亡率,以及细胞平板克隆增殖实验测定不同浓度Y-27632组OTFs细胞增殖克隆形成率.结果 6、30、150、750 μmol/L Y-27632各组经LPA诱导的OTFs细胞增殖抑制D(490)与LPA组比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),OTFs细胞黏附抑制D(490)与LPA组比较,同样具有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).随着Y-27632浓度增加,细胞凋亡率相应增加.未经LPA诱导的OTFs细胞克隆形成率随着Y27632浓度的增高而降低.结论 Y-27632有效抑制LPA诱导的OTFs增殖和细胞间黏附,诱导细胞早期凋亡.
关键词： Y-27632 人Tenon囊成纤维细胞 增殖 凋亡 黏附性 -
Rho激酶与大鼠不稳定膀胱关系的实验研究
目的探讨Rho激酶与不稳定膀胱发生之间的关系.方法建立不稳定膀胱大鼠模型;采用RT-PCR方法测定不稳定膀胱及对照组逼尿肌Rho激酶亚型密度的变化;Rho激酶特异选择性抑制剂Y-27632对逼尿肌肌条自发性收缩频率和收缩力的影响.结果①DI组ROCKⅠ mRNA的表达(0.93±0.14)明显高于对照组(0.60±0.03)(P<0.01);②DI组ROCKⅡ mRNA的表达(0.75±0.07)与正常对照组(0.67±0.10)之间无明显差异(P>0.05);③Rho激酶抑制剂Y-27632 (3 μmol/L)可以显著降低DI组膀胱的自发性收缩频率和自发性收缩张力,对照组无明显影响.结论 Rho激酶与不稳定膀胱的发生有关.
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Rho/Rho激酶在COPD大鼠气道的表达及其对气道重塑的影响
目的 探讨Rho/Rho激酶信号通路在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道中的表达及其对气道的影响.方法 清洁级相同重量级Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、COPD组、Y-27632干预组,每组20只.分析各组大鼠的支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),以及RhoA,RO CKⅡmRNA的表达.结果 与对照组相比,COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高,Wat、Wam也明显增加(P＜0.05)；与COPD组相比,Y-27632干预组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA的表达明显降低,Wat、Wam也明显降低(P＜0.05).结论 COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高；应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够明显控制RhoA,ROCKⅡmRNA的表达,从而抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠的气管壁增厚和平滑肌增殖.
关键词： Rho/Rho激酶信号通路 气道重塑 慢性阻塞性肺疾病 Y-27632 -
Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用
目的 探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用机制.方法 MRL/lpr狼疮小鼠20只随机分为MRL/lpr对照组、5 mg/kg Y-27632处理组,每组10只;野生型对照组C57BL/6小鼠10只.采用ELISA检测各组小鼠血清、脾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)相关炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用Western blot法检测各组小鼠脾脏组织中硫氧还蛋白结合蛋白(Txnip)/硫氧还蛋白(Trx)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)相关蛋白胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38MAPK以及NF-κB的水平;Western blot法检测各组小鼠脾脏T淋巴细胞Txnip、p38MAPK、NF-κB蛋白水平;ELISA检测T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平.结果 Y-27632提高MRL/lpr狼疮小鼠血清及脾脏组织SOD水平;降低血清及脾脏组织MDA水平;降低血清、脾脏组织和脾脏T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平;抑制脾脏和脾脏T淋巴细胞Txnip、MAPK相关蛋白ERK、JNK和p38MAPK以及NF-κB表达,增加Trx含量.结论 Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠有保护作用.
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Y-27632对低氧性肺动脉收缩的作用
目的：探讨Y‐27632对低氧性肺动脉收缩的作用及其机制。方法建立小鼠低氧损伤模型；采用微血管张力实验测定肺动脉收缩力，WB检测TRPC6蛋白表达，离子影像技术测定平滑肌细胞全细胞钙变化。结果与对照组比较，CPA诱导低氧组肺动脉的收缩（加强到了167．9％±68．6％，倡 P＜0．05；Y‐27632可显著抑制这一变化（抑制率为47．3％±17．8％，＃ P＜0．05）；低氧可致肺动脉血管T RPC6蛋白表达显著增加（增加到154．8％±34．3％，倡 P＜0．05），这一变化可被Y‐27632显著降低（降低到134．2％±18．2％，＃ P＜0．05）；CPA诱导低氧组肺动脉平滑肌细胞[Ca2＋]i 显著升高（荧光比率升高到188．9％±46．6％，倡 P＜0．05），此作用可被Y‐27632显著抑制（荧光比率降低了46．7％±14．5％，＃ P＜0．05）。结论 ROCK抑制剂Y‐27632可通过调控T RPC6蛋白表达及其介导的[Ca2＋]i 变化，重要性地参与低氧性肺动脉收缩。
关键词： 钙离子 低氧性肺动脉收缩 经典瞬时受体电位通道蛋白 Y-27632
