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PDE10A文献资料
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通过CRISPR/Cas9系统敲除人源PDE10A基因
目的 建立敲除基因组中PDE10A基因的CRISPR/Cas9系统.方法 设计3个长20bp的sgRNA,分别靶向PDE10A的exon 6、exon 7和exon 11.化学合成sgRNA寡核苷酸序列,并克隆进PX330质粒中.将克隆正确的质粒PX330-sgRNA转染至HEK293T细胞中,提取基因组DNA并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增,再通过SURVEYOR分析和一代测序对敲除效率进行检测.后采用有限稀释法挑选稳定敲除PDE10A的HEK 293T细胞株.结果 目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入PX330质粒中且序列正确;靶向Exon 7的sgRNA可成功敲除PDE10A,且敲除效率高达31.4％;稳定敲除PDE10A的细胞株筛选成功,可导致2 bp缺失.结论 PDE10A基因CRISPR/Cas9敲除系统构建成功.
关键词： PDE10A CRISPR/Cas9 稳定细胞株
