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TAT-β-半乳糖苷酶对小鼠生物膜穿透性的研究
为寻找介导外源蛋白质进入组织细胞的生物学方法,本研究构建了pET28a-TAT-LacZ重组表达子, 纯化得到TAT-β-Gal融合蛋白,通过腹腔注射到小鼠体内观察TAT-β-Gal能否穿过各组织生物膜及达到各组织的时间、浓度.结果发现TAT-β-Gal在短时间内可到达各组织.该研究证明在生物大分子的N-末端加上TAT具有穿透力的蛋白转导区肽段形成的融合蛋白可穿过生物膜到达各组织,这一发现为肽类、生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础.
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HIV TAT——一种生物大分子的运载体
人工合成编码TAT蛋白转导区核心区域11个氨基酸的双链寡核苷酸,构建pET28a-TAT-LacZ表达子,转化大肠杆菌,得到高表达的TAT-βGal融合蛋白.TAT-βGal加入体外培养的平滑肌细胞中,15 min细胞即出现蓝染,1 hTAT-β-Gal 100%进入细胞.该融合蛋白ip到Wistar大鼠体内,30min各组织出现蓝染,4 h光密度值达高峰.实验证明TAT蛋白可有效携带大分子物质穿过生物膜,是一良好的生物大分子运载体.
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PreS-Tat真核表达载体的构建及表达
目的:构建pEGFP-PreS-Tat嵌合载体并在真核细胞中表达.方法:提取人乙型肝炎病毒并用PCR法扩增出PreS片段,定向克隆入pEGFP-C3载体,在PreS下游连接合成的Tat序列,构建成功的pEGFP-PreS-Tat质粒经脂质体转染Hela细胞,Western blot鉴定目的蛋白的表达.结果:酶切和测序结果表明成功地构建了pEGFP-PreSTat嵌合载体,Western Blot结果表明该载体能在Hela细胞中表达pEGFP-PreS-Tat融合蛋白.结论:成功构建pEG-FP-PreS-Tat载体并表达出相应的融合蛋白,为研究该融合蛋白的功能奠定了基础.
