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氧化应激对小鼠NKG2D配体表达的影响
目的 分析氧化应激时小鼠免疫器官和免疫组织的NKG2D配体MULTI和Rael表达的变化,研究氧化应激对免疫系统的影响.方法 给小鼠吸入适量的臭氧,建立动物氧化应激模型;利用real-time PCR和免疫组织化学方法检测小鼠胸腺、脾脏、淋巴结和小肠MULT1和Rael的表达.用流式细胞仪检测胸腺、脾脏的淋巴细胞和小肠上皮间淋巴细胞表面的MULT1和Rael的表达.结果 氧化应激组小鼠胸腺中MULT1表达降低而Rael表达升高;脾脏的Rael表达略有提高,MULT1的表达变化不明显;淋巴结中MULT1的表达变化不明显,Rael表达降低;小肠的MULT1和Rael表达均明显上调,多集中于小肠绒毛的上皮层.结论 MULT1和Rael的表达在体内受到严格的调控.应激分子MULT1和Rael可以作为检测体内应激状态的参考指标.
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MULT1转基因小鼠的基因型鉴定和表型的初步分析
目的 对高亲和力NKG2D配体MULT7转基因小鼠进行基因型的鉴定和表型分析,并进行MULT1的初步功能研究.方法 提取转基因小鼠的基因组DNA,PCR以鉴定转基因小鼠的基因型.提取小鼠尾部组织mRNA进行实时定量PCR,榆测其基因转录情况.应用流式细胞分析仪及免疫组化对MULT1转基因小鼠多种组织细胞进行初步分析.结果 获得鉴定阳性的MULT1转基因小鼠3'S品系25只,4'S品系13只.3'S和4'S品系的MULT1转基因小鼠的基因转录产物阳性,可用于进行下一步研究.MULT1主要表达在胸腺和小肠上皮间淋巴细胞(ilELs),且在胸腺和iIELs表面的表达与小鼠的年龄有关,而在脾脏细胞上基本不表达.iIELs流式细胞仪分析结果显示,CD8~+T细胞比例降低,而CD4~+CD25~+调节性T细胞比例升高.结论 经过基因型和表型的鉴定,表明已经成功构建MULT1转基因小鼠.对转基因小鼠表型的初步分析表明,MULT1可能与胸腺的发育、老化以及免疫调节相关.
