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TRAF2在人B淋巴细胞AP-1信号传导系统中的作用
目的 利用人B细胞株模型探讨TRAF2在调控AP-1信号系统中的作用.方法 将融合有黄色荧光素(YFP)的野生型(WT-TRAF2)或功能缺失型(DN-TRAF2)TRAF2质粒,以及小干扰RNA-TRAF2质粒转染至人类B淋巴细胞株,过夜培养后经流式细胞仪或抗生素G418筛选阳性转染细胞,通过Western blot、ELISA等方法研究TRAF2对AP-1通路中ERK、JNK、P38磷酸化和AP-1亚单位的细胞核内转移等的影响.结果 B细胞过度表达WT-TRAF2可增加ERK和P38的磷酸化水平以及C-FOS的核内转录,而过度表达DN-TRAF2或转染小干扰RNA-TRAF2则减少ERK和P38的磷酸化水平以及C-FOS的核内转录.结论 TRAF2可选择性地作用于人B淋巴细胞AP-1信号传导系统中的部分激酶,对B细胞AP-1信号系统的活化有重要作用.
关键词： 人B淋巴细胞 肿瘤坏死因子受体相关因子2 AP-1信号通路 -
TRAF2在活化B淋巴细胞NF-κB信号传导系统中的作用
目的 肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor associated factor 2,TRAF2)是介导B淋巴细胞表面CD40信号传导的重要因子.目前对TRAF2如何介导CD40核转录因子(NF-κB)信号系统各环节下传还了解不多.本研究利用人B细胞株模型对这方面进行了初步探讨.方法 将人类B淋巴细胞株RAMOS细胞转染融合有黄色荧光素(YFP)的野生型(WT-TRAF2)或功能缺失型(DN-TRAF2)TRAF2质粒,过夜培养后用流式细胞仪分离YFP阳性细胞,然后通过激酶实验、Western blot以及ELISA等方法对NF-κB通路的活化进行包括IκB激酶、IκB磷酸化和降解以及NF-κB的细胞核内转录等多方面的研究.结果 过度表达WT-TRAF2可诱导IκB激酶(IKKα和IKKi/ε)对IκBα(Ser32,36)的磷酸化和降解以及对p65/RelA的磷酸化和p65、p50、c-Rel的核内转录.然而,过度表达DN-TRAF2只抑制p65的核内转录,而不抑制p50和c-Rel.TRAF2也可通过诱导RAMOS B细胞分泌IgM而影响其功能.结论 TRAF2可选择性地激活人B淋巴细胞CD40介导的NF-κB信号传导系统中的重要因子,在B细胞活化分化中起重要作用.
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地表水中有机提取物对人B淋巴细胞DNA的损伤效应
目的 探究地表水中有机提取物对人B淋巴细胞DNA的损伤效应.方法 于2010年6-8月,采集某江流域18个采样点水样并提取有机物.将处于对数生长期的人B淋巴母细胞悬液分别暴露于0(对照)、250、500、1 000 ml/ml水样有机提取物培养24 h;采用CCK-8活细胞计数试剂盒和彗星试验分别研究水样有机提取物对细胞存活率的影响及其DNA损伤效应,并检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量的变化,以评价水样有机提取物的氧化损伤效应.结果 与对照组比较,除250 ml/ml采样点5、11、12水样外,各采样点水样有机提取物在各暴露剂量下对人B淋巴母细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P＜0.01);且随着各采样点水样有机提取物暴露剂量的升高,人B淋巴细胞的存活率呈下降趋势.与对照组相比,采样点4、5、6水样有机提取物在250、500、l 000 ml/ml剂量下对人B淋巴母细胞彗星尾部DNA含量无明显影响,采样点9、11、12和15水样有机提取物仅在1 000 ml/ml剂量下导致人B淋巴母细胞尾部DNA含量增加,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);其余各采样点水样有机提取物在500、1 000 ml/ml剂量下均可导致人B淋巴母细胞彗星尾部DNA含量增加,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与对照组相比,采样点16水样有机提取物在500 ml/ml剂量下对人B淋巴细胞内ROS含量无显著影响(P＞0.05),其余各采样点水样有机提取物在250～1 000 ml/ml剂量范围内均可显著诱导人B淋巴细胞内ROS的产生,差异有统计学意义(P＜0.01);除采样点15外,随着各采样点水样有机提取物暴露剂量的升高,人B淋巴细胞中ROS的含量均呈上升趋势.结论 该流域江水中有机提取物对人B淋巴细胞DNA有显著的损伤效应,可能与细胞内ROS含量增加有关.
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同种异基因抗原特异性调节性T细胞的体外扩增
目的 建立用人B淋巴细胞体外获得大量的同种异基因抗原特异性调节性T(Treg)细胞的方法,以此检测扩增细胞的表型及其免疫无能性和免疫抑制性.方法 第1轮扩增将免疫磁珠分选的人CD4+CD25+T细胞和人B淋巴细胞按1∶4体外混合培养,并加入外源白介素-2(IL-2)和抗-CD28；将第1轮扩增得到的Treg细胞用抗-CD3/CD28包被的免疫磁珠和IL-2刺激,做第2轮扩增以获得更多数量的抗原特异性Treg细胞,分为添加和或未添加免疫抑制剂雷帕霉素( RAPA)2组(n=3).结果 经过2轮的扩增后,在第2轮扩增中未添加RAPA组扩增1×103倍,纯度＞80％；添加RAPA组扩增0.8×103倍,纯度＞90％.添加RAPA组得到的Treg细胞的Foxp3、CTLA4、CD39表达水平高于未添加RAPA组,但是HLA-DR变化不大；未添加RAPA组扩增得到的Treg细胞分泌低水平的IL-2、IL-17、IL-4和IFN-γ,而添加RAPA组得到的Treg细胞几乎不分泌上述各种细胞因子,前者表现出部分免疫反应无能性,后者表现出完全的免疫反应无能性,两者都表现出免疫抑制性功能特征.人B淋巴细胞扩增得到的抗原特异性Treg细胞能够极大地抑制同源抗原引起的免疫反应,而对多克隆刺激的免疫反应抑制能力较弱.结论 用人B细胞体外扩增抗原特异性Treg细胞,再通过抗-CD3/CD28包被的免疫磁珠进一步刺激可以体外获得大量的抗原特异性的Treg细胞,加入RAPA后可有效地提高Treg细胞的纯度和免疫抑制力且呈现抗原特异性.
