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蛋白酶体抑制剂处理神经细胞系后Nicastrin的表达变化及其与Aβ的关系
目的 探讨蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内Nicastrin(NCT)的表达变化,及其与γ-分泌酶活性和Aβ生成的关系.方法 运用亚细胞器分级分离技术、免疫共沉淀、Western blot和ELISA等检测神经细胞内NCT的表达及Aβ水平.结果 正常情况下NCT主要分布于内质网和高尔基复合体,极少量分布于溶酶体,蛋白酶体抑制剂Lactacystin处理后NCT水平升高(P<0.001),且细胞内增多的NCT也主要聚集在内质网和高尔基复合体;NCT与泛素在细胞内共存;NCT的蛋白降解不受PS的影响;NCT降解受阻可引起细胞内γ-分泌酶的底物C99、C83显著减少,而γ-分泌酶的产物Aβ40、Aβ42的生成显著增多(P<0.01).结论 NCT的降解可通过泛素-蛋白酶体途径实现,蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT水平升高,且增多的NCT可促进APP的代谢及Aβ的生成.
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SUMO化修饰与DNA损伤修复
蛋白质的翻译后修饰在很大程度上决定了蛋白质的活性、细胞定位、稳定性及蛋白质之间的相互作用.而在DNA损伤修复过程中,通过调控不同修复蛋白的翻译后修饰来影响他们的活性及细胞定位,进而导致DNA损伤修复途径的不同和修复结果的差异.新近研究表明,蛋白质的SUMO化修饰在DNA损伤修复和基因组稳定性的维护方面发挥重要作用.本文将对SUMO化修饰对DNA损伤修复的调控的新研究进展做一综述.
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泛素连接酶Smurf1促进PDK1的多聚泛素化修饰
目的 探讨3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)发生多聚泛素化修饰的机制.方法 免疫共沉淀(CO-IP)和免疫印迹(WB)分析PDK1的多聚泛素化修饰,MEF细胞内印证泛素连接酶Smad泛素化修饰调节因子1 (Smurf1)增强PDK1多聚泛素化修饰,定点突变和CO-IP及WB确定PDK1多聚泛素化修饰位点.结果 PDK1可发生多聚泛素化修饰,泛素连接酶Smurf1增强PDK1多聚泛素化修饰,且依赖HECT类泛素连接酶Smurf1 K699位点活性;K304是PDK1多聚泛素化修饰位点.结论 泛素连接酶Smurf1增强PDK1的多聚泛素化修饰.
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PKA磷酸化p21WAF后对其泛素化修饰和稳定性的影响
目的:探索p21被蛋白激酶A(PKA)磷酸化修饰后对其泛素化修饰和稳定性的影响.方法:构建p21可能磷酸化位点的突变体p21 T145A,观察PKA体外磷酸化修饰p21;Western印迹分析PKA特异性抑制剂H89对p21稳定性的影响;通过免疫沉淀分析H89对p21泛素化修饰的影响以及p21 Thr 145突变前后和Skp2结合能力的变化.结果:PKA体外磷酸化修饰p21的Thr 145;PKA特异性抑制剂H89能够提高p21的稳定性并抑制p21的泛素化修饰;野生型(wild) p21比p21 T145A结合Skp2的能力强.结论:PKA磷酸化修饰p21的Thr145后导致其结合E3连接酶结合亚基Skp2的能力增强,从而促进p21的泛素化修饰,导致p21稳定性的降低.
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泛素连接酶CUL4A-DDB1复合体参与DNA损伤修复的研究进展
泛素化修饰在DNA损伤信号中发挥重要功能,包括细胞周期监控、DNA修复、细胞衰老和程序性死亡的调控.CUL4A-DDB1泛素连接酶通过DCAFs靶向调控特异性的底物,启动DNA切除修复机制对受损DNA进行修复.近期的研究表明CUL4A-DDB1泛素连接酶协助DNA修复因子与受损DNA的识别,来维持基因组的稳定性和正确性.
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泛素化修饰与细胞自噬
自噬是真核生物中普遍存在的一种高度保守的细胞内降解途径,是细胞在应对营养缺乏或外界应激反应时的保护机制,通过降解细胞内蛋白聚合物、受损细胞器及入侵的病原微生物等来维持细胞的内环境稳态.近年来研究表明,自噬在免疫方面具有广泛的功能,其参与了免疫细胞分化、固有免疫和适应性免疫应答反应的调节,在机体免疫调节中起着关键作用,与多种疾病如肠道疾病、慢性呼吸道疾病、肿瘤、中枢和外周神经系统疾病、自身免疫病等的病理进程密切相关,是目前自噬领域研究的热点.自噬发生的过度与不足均能引发疾病,故需要精密调控.泛素化修饰在自噬形成过程中具有重要调节功能,是目前自噬调控研究的热点.本文主要总结了泛素化修饰在自噬形成过程中的研究进展,并讨论了在以后研究中有待解决的一系列关键问题.
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泛素化修饰对干扰素基因刺激因子介导的固有免疫信号通路的调控
自20世纪70年代发现泛素可以调节蛋白降解过程后,科研人员针对泛素化修饰相关问题开展了一系列研究.目前已阐明泛素是一种多功能的分子标志物,它可以通过蛋白酶体依赖与非蛋白酶体依赖2种途径来调控各种细胞过程.多聚泛素链与靶蛋白之间不同的连接方式决定了靶蛋白特定的生理和病理功能.近年来研究发现,泛素化修饰在宿主抗胞内RNA或DNA病毒感染的过程中起到了至关重要的作用,而干扰素基因刺激因子(STING)是抗病毒感染中的关键分子.因此,本文主要总结了泛素化修饰对STING调控的研究进展,并讨论了在今后的研究中有待解决的一些关键问题.
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黑色素瘤抗原泛素连接酶的研究进展
黑色素瘤抗原(melanoma-associated antigen gene,MAGE)被视为一种肿瘤标志物和免疫治疗的热门对象.研究发现MAGE联合E3-RING泛素连接酶形成MAGE-RING连接酶复合体(MAGE-RING ligases,MRLs),成为泛素化的调控因子,从而调控连接酶的活性、底物的特异性和亚细胞定位.该文就MRLs的结构、活化机制和转录功能作一综述.
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DAXX翻译后修饰的研究进展
Fas死亡结构域相关蛋白(Fas death domain-associated protein) DAXX是一种高度保守的核蛋白,广泛分布于核质、核仁、胞浆、异染色质和早幼粒细胞白血病蛋白核体(PML-NBs)等亚细胞区域,在细胞凋亡和转录调控中发挥重要作用.DAXX功能的调控涉及一系列的翻译后修饰,包括泛素化修饰、类泛素样蛋白修饰、磷酸化修饰,通过修饰,可引起DAXX在各亚细胞区域间的转位,也可引起DAXX参与的生理功能的改变.本文对DAXX此方面的研究进展做一综述.
