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PGF2α对培养的人眼睫状肌细胞流体阻力的作用
定性观察PGF2α对培养的人眼睫状肌细胞流体阻力的作用,以探讨PGF2α降眼压作用机制.用第4代传代第14天的人眼睫状肌细胞在Transwell上构成流体阻力模型,选取流速差异在15%以内的一对Transwell作为实验对象,观察浓度为2 ×10-7mol/L的PGF2α能否使流速较慢的Transwell的流速超过原流速较快者.共做三次并做不加药对照观察.实验组及对照组中流速较慢的Transwell的流速提高均未达到15%.因此浓度为2×10-7mol/L的PGF2α未能使经过本实验中培养的人眼睫状肌细胞的流体流速提高15%.
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PGF2α类抗青光眼药Unoprostone对培养猴睫状肌细胞中胶原Ⅲ、Ⅳ及MMP-1表达的影响
目的:探讨前列腺素F2α(prostaglandin F2α, PGF2α)类抗青光眼药Unoprostone对猴的降眼压作用机制是否与睫状肌中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)及细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的表达有关. 方法:采用免疫细胞化学方法对培养猴睫状肌细胞中胶原Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ及MMP-1的分布进行观察.比较10-6mol/L PGF2α、Unoprostone代谢物M1及M2对睫状肌细胞作用前后胶原Ⅲ,Ⅳ及MMP-1的染色变化. 结果:胶原Ⅲ,Ⅳ及MMP-1在培养猴睫状肌细胞内外分布各异,胶原Ⅰ未见明显染色;10-6mol/L PGF2α、Unoprostone代谢物M1及M2分别使猴睫状肌细胞中胶原Ⅲ,Ⅳ减少,MMP-1表达增强.结论: Unoprostone增强猴睫状肌MMP表达,引起ECM降解加强,表明其降眼压机制为使睫状肌束间隙增大,葡萄膜巩膜房水流出加强.
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体外培养人眼睫状肌细胞的流体阻力定性观察
目的 定性观察体外培养的人眼睫状肌细胞流体阻力的稳定性,探讨作为体外实验模型的可行性.方法 培养的第4代人眼睫状肌细胞传代在Transwell半透膜上,按培养8、14、20 d分为三组共15份,在细胞层上下造成7 mm液面差异,观察上层液体渗透至与下层液面持平所需时间.结果 除第8天组不够稳定外,另两组有60%Transwell的液体流速的误差在15%以内,80%以上的误差在30%以内.结论 该模型对流体的阻力是基本稳定的.
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前列腺素F2α单独及联合应用抗炎药物对人眼睫状肌细胞内钙离子浓度的影响
目的 观察抗炎药物对前列腺素F2α(prostaglandin F2α,PGF2α)产生的人眼睫状肌细胞内钙离子浓度变化作用的影响.方法 用Fluo-3对培养的第4代人眼睫状肌细胞内钙离子浓度进行荧光标记,在激光扫描共聚焦显微镜下测量荧光强度,分别记录10-9mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1、10-5mol·L-1PGF2α单独应用及10-6mol·L-1PGF2α与10-5mol·L-1消炎痛、10-6mol·L-1PGF2α与10-4mol·L-1地塞米松磷酸钠联合应用产生的荧光强度的变化.结果 PGF2α可引起剂量相关的荧光强度变化.10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1、10-5mol·L-1PGF2α单独应用及10-6mol·L-1 PGF2α与10-5mol·L-1消炎痛、10-6mol·L-1PGF2α与10-4mol·L-1地塞米松磷酸钠联合应用产生的荧光强度变化率分别为(165±30)%、(210±23)%、(262±45)%、(451±73)%、(268±57)%、(257±28)%,与10-6mol·L-1PGF2α单独作用相比,加入10-5mol·L-1消炎痛或10-4mol·L-1地塞米松磷酸钠再加入10-6mol·L-1PGF2α产生的荧光强度变化率差异均无统计学意义(P0.05).结论 抗炎药物对PGF2α产生的人眼睫状肌细胞内游离钙离子浓度变化的作用没有显著性影响.
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曲伏前列腺素对培养人眼睫状肌细胞基质金属蛋白酶-2表达的影响
[目的]研究曲伏前列腺素作用下,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在人睫状肌细胞的表达.[方法]在人睫状肌细胞无牛血清培养基中加入1 μmol/L曲伏前列腺素(travoprost),根据曲伏前列腺素孵育时间的不同,分为4个时间组,即0 h组(对照组)、6 h、12 h、24 h组.Real-time PCR和ELISA法分别检测上述各时间组人睫状肌细胞MMP-2在基因和蛋白水平的表达,每种方法分别重复做3次.Zymography技术分别检测4组细胞MMP-2的活性,重复4次.[结果]设定对照组mRNA相对表达量为1做作标准,6 h、12 h、24 h组MMP-2 mRNA相对表达量为0.58±0.04、1.20±0.05、1.95±0.11,MMP-2 mRNA表达呈逐渐升高趋势(P=0.000);ELISA检测MMP-2的A值分别为0.0503±0.0021、0.0627±0.0017、0.0673±0.0025、0.0783±0.0039,MMP-2的表达随travoprost作用时间延长逐渐升高(P=0.000).Zymography技术检测MMP-2校正光密度值分别为10±5,52±7,104±21,237±40;MMP-2活性随travoprost作用时间延长而逐渐增强(P=0.000). [结论]曲伏前列腺素作用于人睫状肌细胞后,MMP-2表达随药物作用时间延长逐渐增加,活性逐渐增强.
