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抗埃博拉病毒核蛋白NP人-鼠嵌合抗体的研究
埃博拉病毒感染致死率高可达90％,属烈性传染病,检测诊断对于疫情控制就显得异常重要.目前我国实验室通过实时定量荧光PCR检测埃博拉病毒核酸进行确诊,但耗时相对较长,对检测的人员和仪器要求较高.ELISA法检测血清是病原学诊断的主要指标,该种检测方法简单易操作,能够有效判断患者是否感染埃博拉以及感染程度,可用于流行病学调查,血清学指标的检测可以作为核酸检测的有力补充.由于埃博拉出血热在我国境内尚无病例出现,尤其需要储备血清学检测阳性质控物.通过基因工程抗体技术构建并表达抗埃博拉病毒核蛋白NP人-鼠嵌合抗体,为埃博拉出血热血清学检测做人源阳性对照储备.采用RT-PCR技术,从分泌抗埃博拉核蛋白单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞株中分离克隆抗体轻重链可变区基因,对其进行序列分析.根据序列分析的结果,设计特异性引物将鼠源抗体可变区基因VH、VL分别克隆至携带有人抗体轻重链恒定区基因的真核表达载体HL51-14,瞬时转染293T细胞,表达并纯化获得人鼠嵌合IgG抗体,随后对其进行了免疫学检测和功能鉴定.结果表明正确构建抗埃博拉病毒核蛋白人鼠嵌合抗体真核表达载体,成功表达并纯化获得两株人鼠嵌合单抗.
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NBS法标记CEA人鼠嵌合抗体rch24的初步研究
目的:研究125I直接标记CEA人鼠嵌合抗体rch24的方法.方法:采用NBS(溴代琥珀酰亚胺)法进行碘标,并测定标记物的放射化学纯度、标记率和体外稳定性.结果:采用纸层析法测定的标记率和放射化学纯度分别为97.2%±0.4%和95.5%±0.2%;标记抗体体外4℃存放,放射化学纯度逐渐下降,14天后降为92.6%,35天后为89.3%.结论:标记物具有较高的放射化学纯度及稳定性,为体内治疗打下良好的基础.
关键词： N-溴化琥珀酰亚胺法 人鼠嵌合抗体 放射性同位素 -
小鼠尾静脉注射125I标记的抗CEA人鼠嵌合抗体rch24的药代动力学研究
目的探讨125 I-rch24在小鼠体内的药代动力学过程.方法7只BABL/c小鼠,溴代琥珀酰亚胺(NBS)法标记的抗体125I-rch24尾静脉注射,于注射后不同时间尾根部取血,测定放射性计数,绘制血清除曲线,计算药代动力学参数.结果①125I与CEA人鼠嵌合抗体rch24结合,采用纸层析法测定的标记率为95.5%±0.2%;②标记抗体的放射化学纯度至14天后为92.6%,35天后为89.3%;③经计算机模拟,为双指数曲线,标记抗体的血液分布、清除符合二房室模型.结论正常小鼠尾静脉注射标记抗体125I-rch24后的药代动力学过程符合二房室模型,静脉注射适宜用于结肠癌放射免疫导向手术.
