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福建省慢性HBV感染者HBV基因S区、基本核心启动子区和前C区基因变异特征分析
为研究福建省慢性HBV感染者HBV基因多样性及变异规律,了解该人群HBV-DNA的病毒学特征.收集慢性HBV感染者血清标本,通过巢式PCR法扩增其HBV基因序列,比对NCBI数据库中标准基因型序列,分析HBV基因S区,基本核心启动子区(BCP)及前C区的序列变异情况,并对这些变异可能造成的病毒抗原表达,疫苗逃逸,患者病症改变等情况进行探讨.终成功扩增82例HBV全长基因序列,其中B基因型56例,C基因型26例.基因组特定功能区序列分析发现慢性HBV感染者HBV基因在S区(23.2％)、BCP区(61.0％)和前C区(29.3％)均出现了不同程度的变异.其中主蛋白(HBsAg)主要抗原决定簇a决定簇45.8％位点出现了变异,这些变异位点中包括与肝炎重症化及免疫逃逸密切相关的位点(aa126、aa129、aa145等).位点G1896A(19.5％),G1764A(11.0％)和A1762T(9.8％)依然是BCP/前C区的主要突变位点.而位点A1752G(25.6％)高突变率的出现在BCP区应引起关注.此外位点G1764A(x2=5.742,P=0.030)、A1896G(x2=14.392,P=0.000)以及A1762T/G1764A(x2=7.289,P=0.012)的突变更容易发生在HBeAg阴性的样品中;而位点A1846T(x2=11.882,P=0.003)、A1762T(x2 =6.561,P=0.038)和A1896G(x2=6.958,P=0.030)的突变与HBV-DNA的病毒载量存在一定相关性.总之,福建省慢性HBV感染者在HBV不同基因功能区域均存在不同程度的变异,一些与HBeAg表达情况、HBV-DNA载量、疫苗免疫逃避及肝细胞癌发生具有相关联的变异位点已经出现,BCP区A1752G位点的高频率出现应值得关注,对于这些变异位点的患者应加强监测.
关键词： 乙型肝炎病毒(HBV) 基因变异 基本核心启动子(BCP) 前C区 -
乙型肝炎病毒基本核心启动子A1762T/G1764A位点基因多态性检测方法的建立及应用
[目的]建立多聚酶链式反应-限制性片段长度多态分析(PCR-RFLP)法检测乙型肝炎病毒(HBV)C区基本核心启动子区(BCP)A1762T/G1764A联合突变并对部分临床标本进行检测.[方法]根据HBV BCP区基因设计引物,在G1764位设计MboⅠ酶切位点,根据PCR产物酶切结果判断该位点为G或A.[结果]测序及序列比较显示本文一株突变株:DT-BCP确为1762T/1764A变异株;HBeAg阳性慢性乙肝A1762T和G1764A位点双突变率为60%(18/30),HBeAg阴性组为53.3%(16/30),两组变异率无显著性差异(x2=0.271,P=0.602).[结论]本文建立的方法可用于检测HBV BCP区A1762T/G1764A位点双突变.
