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一株小鼠诺如病毒的分离和鉴定及全基因组序列分析
小鼠诺如病毒(Murine norovirus,MNV)属于杯状病毒科诺如病毒属成员,是2003年新发现的感染实验小鼠的病毒,也是目前已知的小鼠病毒中感染率高的一种病毒.本研究利用RAW264.7细胞从MNV感染小鼠的盲肠内容物中进行病毒分离,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法、病毒空斑试验、TCID50试验、电镜观察、间接免疫荧光试验和测序分析等方法对分离到的病毒进行鉴定,结果显示RAW264.7细胞接毒24～48h后出现明显的细胞病变,表现为细胞圆缩、变亮、聚集,后大部分细胞死亡脱落.分离株在RAW264.7细胞上传代至第2～3代时可出现稳定的细胞病变.经病毒空斑试验获得一株纯化病毒,病毒滴度TCID50为10525/0.1mL.电镜观察可见明显的病毒颗粒,颗粒呈球形,无囊膜,直径约30～35nm.分离株经鉴定后命名为MNV Guangzhou/K162/09/CHN.采用RT-PCR技术分段扩增基因组开放阅读框(ORF),同时应用3'-RACE和5'-RACE技术扩增基因组的3'-UTR和5'-UTR,分别对扩增片段进行克隆和测序,经拼接后获得分离株全基因组序列.结果显示分离株基因组序列全长7 380个核苷酸(GenBank登录号:HQ317203),将分离株全基因组序列与GenBank登录的国外参考毒株进行同源性比较,结果表明该毒株与其他MNV分离株核苷酸同源性为87.4％～89.7％.基于VP1蛋白核苷酸序列绘制MNV毒株系统发生进化树,结果表明该分离株与来自日本(S7-P2和S7-PP3)、美国(CR3和CR18)、韩国(K4)和德国(Berlin/04/06/DE和Berlin/05/06/DE)的毒株进化距离较近,同属一个进化分支.本研究是国内首次对MNV病毒进行分离鉴定和全基因组序列分析的报道.
关键词： 小鼠诺如病毒(MNV) 病毒分离和鉴定 遗传进化分析 -
不同途径感染小鼠诺如病毒对小鼠抗体水平和病毒复制的影响
目的 探讨小鼠诺如病毒(MNV)不同接种途径对小鼠血清抗体水平和病毒复制的影响.方法 MNV(4×104拷贝/μL)分别以静脉、腹腔联合注射(iv+ip)、饮水(dw)、灌胃(ig)3种不同途径接种ICR小鼠,各组于感染前(O d)、感染后3d、6d、14d、25 d、34 d、51d随机剖检2～3只小鼠,收集血清和心、肝、脾、肺、肾、脑、胃肠内容物,利用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时定光定量(qRT-PCR)方法分别检测血清抗体和病毒载量.结果 所有感染小鼠均无明显临床症状.3种途径接种的小鼠在感染后25 d均可检测到特异性抗体.抗体产生初期以ig接种组抗体水平高,随后iv+ip接种组抗体水平上升幅度大并在51d高于其它接种组.小鼠接种MNV3d可在3组接种鼠的胃肠道、脾、脑中检测到病毒核酸,各组的组织脏器病毒载量有差异,其中iv+ip接种组盲肠内容物(3～51 d)、脾(6 d)和肝(14 d)病毒载量高于其它两组.结论 不同接种途径对MNV在小鼠抗体水平和病毒载量影响较大.iv+ip感染效果较好,可作为MNV病毒感染模型的有效接种方式.血清抗体ELISA检测结合盲肠内容物核酸检测有利于MNV早期监测.
关键词： 小鼠诺如病毒(MNV) 血清学 病毒复制 感染 途径
