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A型禽流感病毒M2e重组T7噬菌体疫苗构建及免疫原性研究
构建展示A型禽流感病毒M2e多肽的重组T7噬菌体,检测其对SPF鸡的免疫保护效果.比对GenBank近期发表的A型禽流感病毒M2e基因序列进行人工合成并重复至两拷贝,将其克隆到T7 Select 415-1b噬菌体多克隆位点,构建重组噬菌体T7-M2e.经PCR鉴定并序列测定筛选阳性重组噬菌体,SDS-PAGE和Westernblot检测重组噬菌体表面M2e多肽.重组噬菌体以1×1010pfu/只剂量免疫SPF鸡,免疫后不同时间段采血通过ELSIA检测血清中抗M2e抗体,免疫荧光检测血清抗体与H9亚型禽流感病毒的结合能力,并以200个EID50/只剂量进行攻毒保护效率检测.成功构建重组噬菌体T7-M2e,插入两拷贝M2e基因获得表面展示,并与M2e抗体有免疫反应活性.噬菌体疫苗免疫后均产生抗M2e抗体,其抗血清能跟病毒粒子特异性结合,攻毒保护率达4/5(80％).获得了展示禽流感病毒M2e多肽的重组噬菌体,噬菌体疫苗免疫鸡产生较高血清抗体并提供攻毒保护,为新型通用禽流感疫苗研制提供新思路.
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表达KDR的T7噬菌体疫苗对小鼠异位移植肿瘤的免疫治疗
目的构建KDR基因重组的T7噬菌体疫苗以及研究其对小鼠异位移植肿瘤(Lewis肺癌)的免疫治疗.方法克隆KDR的膜外Ⅱ区基因,构建KDR基因重组T7噬菌体疫苗,免疫小鼠,免疫4次后接种Lewis肺癌,观察肿瘤的生长情况,14d后眼球取血,脱颈椎杀死小鼠,取出瘤体称重,计算抑瘤率,观察免疫治疗效果.结果实验组抑制程度明显,肿瘤生长速度慢,肿瘤重量与生理盐水组和空白噬菌体组相比有统计学差异(P＜0.05),抑瘤率可达57.0%,远大于空白噬菌体组(16.0%).结论 KDR基因重组的T7噬菌体疫苗对小鼠Lewis肺癌具有明显的抗肿瘤作用,用人源KDR作为免疫原免疫小鼠通过免疫交叉反应可以打破对自身抗原的免疫耐受,产生特异性的免疫反应.
关键词： 血管内皮生长因子受体2(KDR) 噬菌体疫苗 肿瘤治疗 -
异种血管内皮生长因子基因重组T7噬菌体疫苗对小鼠Lewis肺癌的抑制作用
背景与目的:肿瘤的生长、转移和新生血管生成有密切关系,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是已知作用强、专一的促血管生成因子.本实验采用噬菌体展示技术,构建人血管内皮生长因子重组T7噬菌体疫苗,并检验疫苗对小鼠Lewis肺癌的抑制作用.方法:用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)从人肺癌组织克隆出人VEGF165基因,将人VEGF165基因与T7Select10-3b噬菌体基因重组,构建T7 Select10-3b_VEGF噬菌体疫苗,制备噬菌体效价达到1×1013 pfu/ml.将C57BL/6J小鼠随机分为3组,T7-VEGF疫苗组10只、空白噬菌体组(T7)10只、生理盐水组(NS)10只.将各组样品与等体积弗氏佐剂混合,各组小鼠每只每周分别免疫1×1012 pfu/200μl重组噬菌体疫苗、空白噬菌体、生理盐水,共免疫4周.接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤的生长情况和小鼠状态.接种肿瘤14天后,处死小鼠,剥离肿瘤称重,检测小鼠血清中特异性抗VEGF抗体滴度、肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD).结果:T7-VEGF疫苗组,T7组、生理盐水组肿瘤均重分别为:(0.543±0.259)g、(0.982±0.359)g、(1.169±0.460)g.疫苗组肿瘤重量明显小于生理盐水组(P＜0.01).疫苗组血清产生抗VEGF抗体滴度为1:1000.疫苗组、空白噬菌体组、生理盐水组MVD分别为:8.5±0.8,16.4±1.3,18.5±1.6.疫苗组MVD明显小于生理盐水组.结论:异种血管内皮生长因子基因重组T7噬菌体疫苗可干扰机体对自身VEGF的免疫耐受,可产生较高水平的特异性抗VEGF抗体,并具有抑制小鼠Lewis肿瘤生长的效应.
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血管内皮生长因子基因重组T7噬菌体肿瘤疫苗的免疫活性
目的:采用噬菌体展示技术,构建人血管内皮生长因子重组T7噬菌体疫苗,并检验疫苗诱导小鼠产生特异性抗体的免疫活性.方法:将人VEGF165基因与T7 Select10-3b噬菌体基因重组,构建T7 Select10-3b-VEGF噬菌体疫苗.将疫苗免疫C57BL/6J小鼠.免疫4周后,用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗VEGF抗体滴度.结果:疫苗组血清产生较高水平抗VEGF抗体.结论:异种血管内皮生长因子基因重组T7噬菌体疫苗可打破机体对自身VEGF的免疫耐受,诱导产生较高水平的特异性抗VEGF抗体.
